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细胞凋亡又称细胞程序性死亡,细胞凋亡过程的紊乱可能与许多疾病的发生有直接或间接的关系。如肿瘤、自身免疫性疾病、神经退行性疾病等,具有重要的生物学意义及复杂的分子生物学机制。它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用。阿尔茨海默氏症(Alzheimer’s disease,AD),是一种神经退行性疾病,通过解剖学研究发现,大脑皮层萎缩,并伴有β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积、神经纤维缠结、大量记忆性神经元变性凋亡是此病的病理特征,目前发病机制尚不明确。研究证明,神经元的不可再生性使神经细胞凋亡导致的大脑功能衰退成为不可逆过程。目前的治疗的重要方向之一就是如何阻断大量神经元的退化凋亡。早老素1(PS1)是阿尔茨海默氏症的风险基因,50%的家族性阿尔茨海默氏症中可检测到PS1的基因突变。早老素1相关蛋白(PSAP)是特异性定位于线粒体的促凋亡蛋白,PSAP同样在阿尔茨海默氏症患者中大量表达,而且可与PS1相互作用。DR6是死亡受体家族的一员,DR6在细胞中过表达能够诱导细胞凋亡。研究发现DR6与神经变性退化密切相关,DR6能够与Aβ的前体N-APP相结合引起神经元的凋亡。本文主要讨论PS1,PSAP和DR6在与阿尔茨海默氏症相关的细胞凋亡中的作用和相互关系。在TNFα与CHX联合处理的细胞中,我们利用双酵母交杂系统,证明DR6与PSAP相互作用,而PSAP是因为与PS1相互作用而发现的,PSAP在PS1诱导的细胞凋亡中发挥重要的作用。因此为了明确PSAP在DR6诱导的细胞凋亡中的作用,我们利用siRNA技术降低PSAP的蛋白表达水平,结果显示几乎完全抑制了DR6诱导的PARP裂解产物的生成及caspases的活化,证明PSAP在DR6诱导的细胞凋亡中起着关键的作用。利用免疫沉淀技术,检测到了PSAP-DR6,PSAP-Bax复合物的形成,本文只在细胞质组分检测到DR6-Bax复合物,而在线粒体组分中检测到BAX-PSAP复合物的形成,并发现了PSAP能够调控Bax从胞浆转移到线粒体。尽管PSAP与Bax都能阻断DR6诱导的PARP裂解与caspase活化,但不能影响DR6诱导的相关复合物的形成。为了深入探讨相关分子机制,我们进一步研究了PS1在DR6诱导细胞凋亡中的作用,本文通过免疫沉淀技术,在DR6诱导的细胞凋亡中,检测到DR6与PS1相互结合,且PS1与Bax也存在相互作用。当降低PS1的蛋白表达后,DR6诱导的细胞凋亡被完全抑制,与PSAP不同的是,PS1的缺失阻断了DR6诱导的PSAP-DR6、PSAP-Bax、Bax-DR6复合物的形成,这一结果证明了PS1在DR6诱导的细胞凋亡中起着至关重要的作用。为了进一步明确DR6、PS1与PSAP相互作用的分子机制,本文利用蔗糖浓度梯度离心法分离了线粒体和线粒体相关ER膜(MAM),发现DR6和PS1在线粒体和MAM上均有表达。说明DR6作为跨膜蛋白,它和线粒体相关蛋白PSAP的相互作用可能发生在MAM上,它和PS1的相互作用也可能发生在MAM上,为寻找DR6、PSAP和PS1相互作用的结合位置提供有力证据,是它们三者相互作用的基础。以上研究有利于进一步明确阿尔茨海默氏症的致病机理,有利于研发预防或延迟阿尔茨海默氏症的新型药物。