论文部分内容阅读
目的:环氧化酶-2(COX-2)抑制剂有一定的抗肿瘤作用,其中选择性COX-2抑制剂塞来昔布(Celecoxib)已被美国FDA批准治疗家族性腺瘤息肉(FAP)。但作用于子宫肌瘤的相关研究少有报道,有报道COX-2抑制剂能抑制子宫肌瘤细胞增殖。为了进一步探讨COX-2抑制剂对子宫肌瘤的作用,我们对体外培养的人子宫肌瘤细胞使用选择性COX-2抑制剂Celecoxib进行体外毒性试验,并对其细胞信号传导通路的相关分子进行研究,探讨环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布(celecoxib)对子宫肌瘤细胞的增殖抑制作用和分子机制。材料及方法:选取山西医科大学第一临床医学院妇产科2007年8月至2007年11月因子宫肌瘤行子宫全切术,术后经病理证实为正常子宫平滑肌和子宫肌瘤细胞的病例15例,年龄35～45岁,所有标本在无菌条件下进行细胞培养。将培养出的人子宫平滑肌细胞和子宫肌瘤细胞分别用鼠抗人结蛋白(Desmin)以及鼠抗人平滑肌肌动蛋白(α-actin)进行免疫细胞化学法鉴定。将培养出的子宫平滑肌细胞和子宫肌瘤细胞分为正常子宫平滑肌组、肌瘤组、肌瘤加药组(单纯加入Celecoxib,终浓度为12.5、25、50μmol/L),每组6瓶。用倒置显微镜观察细胞形态学改变。用MTT法进行细胞计数,绘制细胞生长曲线。对加药48h后的各组细胞进行RT-PCR,产物经琼脂糖凝胶电泳后用图像分析仪进行半定量分析,以各个目的片段与GAPDH的比值作为其mRNA的相对表达量。实验重复3次,取平均值。采用SPSS13.0统计软件分析数据,结果以(?)±s表示,显著性检验采用单因素方差分析。以P＜0.05为差异具有统计学意义。结果:消化后状态好的子宫平滑肌细胞呈长梭形或椭圆形,在培养24小时后贴壁良好,48小时左右即开始形成细胞克隆,一周左右细胞克隆间发生融合。所培养的细胞形态呈典型的长梭状,成束的平滑肌细胞平行排列,部分细胞重叠生长达多层,部分区域可见典型的“峰一谷”样生长。免疫细胞化学法鉴定结果,α-actin染色阳性,阳性细胞胞浆染成棕黄色,核为蓝色;Desmin染色阴性。从生长曲线可以看出,不同浓度Celecoxib(6.25,12.5,25和50μmol/L)作用于子宫肌瘤细胞24、48、72h后,塞来昔布对培养的人子宫肌瘤细胞表现出明显的增殖抑制效应,其作用呈剂量和时间依赖性(24、48、72 h各浓度实验组与相应对照组比较P值均＜0.05)。细胞培养3d后加药,加药48h后收集细胞行RT-PCR。半定量RT-PCR结果显示子宫肌瘤细胞中存在Wnt5b、β-catenin、c-myc基因而正常的子宫肌层组中无表达。Celecoxib(12.5,25、50μmol/L)作用于子宫肌瘤细胞48h后,下调了细胞中上述基因的表达,其作用呈剂量依赖性,表现出明显的活化抑制。结论:1.人子宫肌瘤细胞上存在Wnt信号通路。2.塞来昔布(celecoxib)可显著抑制体外培养的人子宫肌瘤细胞增殖,随着药物剂量的增加和时间的延长,子宫肌瘤细胞的增殖和活化明显抑制,呈剂量和时间依赖性。3.塞来昔布(celecoxib)通过COX-2途径和非COX-2途径抑制子宫肌瘤细胞的增生,其非COX-2途径是通过Wnt信号通路实现的。子宫肌瘤细胞中Wnt5b、β-catenin、c-myc基因的表达与Celecoxib浓度呈负相关。