MCM7基因对人肝癌细胞周期的影响机制探究

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目的:构建稳定沉默微小染色体维持蛋白7(mini-chromosome maintenance protein 7,MCM7)基因的人肝癌SMMC-7721、MHCC-97H、 HepG2细胞模型。方法:通过构建能够沉默MCM7基因表达的慢病毒RNA干扰载体,进行转染人肝癌SMMC-7721、MHCC-97H、HepG2细胞,进而沉默细胞中MCM7基因的表达。并通过实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法验证MCM7基因的沉默效率。结果:构建出稳定沉默MCM7基因的人肝癌SMMC-7721、MHCC-97H. HepG2细胞,经验证MCM7基因表达在mRNA及蛋白质表达水平均下调。结论:本研究中利用慢病毒载体和RNA干扰技术构建的RNA干扰慢病毒颗粒,转染人肝癌细胞后,经过筛选,能够成功构建稳定沉默MCM7基因人肝癌细胞系。目的:探究MCM7基因在调节人肝癌细胞周期中的相关机制。方法:采用人全基因组表达谱芯片,筛选稳定沉默MCM7基因后的人肝癌SMMC-7721细胞中的差异表达基因,并进行生物信息学分析。采用实时荧光定量PCR对筛选出的细胞周期通路中的差异表达基因及预测到可能参与MCM7调节机制的人泛素启动子UBB(ubiquitin b)的表达水平进行验证。结果:通过人基因表达谱芯片筛选出稳定沉默MCM7基因的人肝癌SMMC-7721细胞中,差异表达基因1010个。其中上调基因391个,下调基因619个。生物信息学分析发现这些基因主要涉及生物大分子代谢、细胞周期调控、细胞增殖、细胞凋亡等方面,参与胞吞、肿瘤相关通路、P53信号通路、mTOR信号通路、细胞周期等通路的改变。筛选出细胞周期通路中差异表达基因10个,经实时荧光定量PCR证实,在沉默MCM7基因的人肝癌SMMC-7721、MHCC-97H、HwpG2细胞中,MCM7、SKP2、CCND1、 TP53、MAD2L1、CDC45、CDK6、DBF4基因表达均发生下调;CDC25A基因在沉默MCM7基因后的SMMC-7721、HepG2细胞中表达下调,在沉默MCM7基因后的MHCC-97H细胞中表达未见差异;TTK基因在沉默MCM7基因后的SMMC-7721、MHCC-97H细胞中表达上调,在沉默MCM7基因后的HepG2细胞中表达下调。而可能参与MCM7调节机制的人泛素启动子UBB在沉默MCM7基因的人肝癌细胞SMMC-7721、MHCC-97H、 HepG2中其mRNA水平均出现表达下调。结论:应用人基因表达谱芯片,筛选出沉默MCM7基因后人肝癌细胞周期相关差异表达基因,为探究MCM7基因影响肝癌细胞生长提供了线索。
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