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目的:在对肿瘤的治疗过程中,肿瘤细胞对药物耐药是一个函待解决的难题。课题组前期研究发现,下调MALAT1的表达可以逆转A549细胞株对吉非替尼的耐药性。但是其中的具体机制我们并不清楚。Lin28是一个肿瘤干细胞相关基因,它在多种肿瘤中异常表达,并与肿瘤的低分化和不良预后有关,Lin28(Lin28A)和它的同源基因Lin28B与恶性肿瘤的发生、进展、预后以及诱导多功能干细胞形成等密切相关。上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)是指在外界环境刺激下,上皮细胞转化为间充质细胞的现象。EMT的发生与肿瘤的形成和转移密不可分。近年来,越来越多的研究发现,肿瘤细胞的耐药与肿瘤干细胞基因Lin28高表达和EMT的发生有密切的关系。本实验主要探究抑制MALAT1表达是否可以通过影响Lin28表达和EMT的发生这两条途径来逆转肺癌细胞株A549对吉非替尼的耐药。方法:(1)用PCR和Western Blot方法分别检测Lin28A和Lin28B在A549(耐药)细胞株和HCC827(敏感)细胞株中表达水平。(2)用Western Blot方法分别检测E钙粘蛋白(E-Cadherin)和波形蛋白(Vimmentin)在A549(耐药)细胞株和HCC827(敏感)细胞株中表达水平。(3)用siRNA转染A549(耐药)细胞,检测转染效率,抑制MALAT1表达。(4)CCK方法检测转染前后A549对吉非替尼的耐药情况。(5)用PCR和Western Blot方法检测Lin28在转染组(MALAT1表达受到抑制)A549(耐药)细胞株中表达水平。(6)用Western Blot方法分别检测转染组(MALAT1表达受到抑制)和未转染组中E-Cadherin和Vimentin在A549(耐药)细胞株表达水平。结果:(1)在A549细胞株与HCC827细胞株中,Lin28A表达量存在差异,但是差异不具有统计学意义(P>0.05);Lin28B在A549中基因和蛋白水平均明显高于HCC827,具有统计学意义(P<0.05)。(2)与HCC827细胞株相比,A549细胞株中E-Cadherin蛋白的表达水平下调,具有统计学意义(P<0.05);Vimentin蛋白表达水平上调,有统计学意义(P<0.05)。(3)与未转染组相比,转染组对吉非替尼耐药性下降,(P<0.05),有统计学意义。(4)与未转染组相比,细胞转染组中MALAT1表达受到抑制,Lin28B基因和蛋白表达水平均下降且有统计学意义(P<0.05);(5)与未转染组相比,细胞转染组E-Cadherin表达水平升高,具有统计学意义(P<0.05);Vimentin表达水平降低,具有统计学意义(P<0.05);结论:(1)Lin28B和EMT可能参与了 A549对吉非替尼耐药的相关机制。(2)MALAT1可能通过影响Lin28B来逆转A549对吉非替尼的耐药。(3)MALAT1可能通过影响EMT来逆转A549对吉非替尼的耐药。