研究背景目前组织缺损修复仍面临巨大挑战,由于自体组织移植受限,故组织工程将发挥其优势作用。利用组织工程学方法修复组织缺损,再生组织的血管化是其中关键之一。生物支架是组织工程学的重要组成部分,支架有效快速的血管化能大大提高组织存活能力,故具有优越成血管特性的支架材料将对组织修复发挥重大作用。有研究表明氧化石墨烯（Graphene Oxide,GO）的促血管效应与其浓度密切相关,但其促内皮祖细胞（Endothelial Progenitor Cells,EPCs）成血管的适宜浓度和具体机制尚不明确。研究目的探索不同浓度的GO/CS（Chitosan,CS）水凝胶对EPCs的增殖活性、细胞毒性影响,进一步探究其对EPCs成血管相关功能的影响及机制。研究方法1.通过京尼平交联0%、0.1wt%、0.5wt%、1.0wt%GO和CS制备水凝胶,通过扫描电镜、孔隙率、傅里叶变换红外光谱仪、X射线衍射仪分析GO加入后水凝胶材料结构变化,通过对水凝胶的溶胀率及拉伸性能检测其理化性能的改变。2.将EPCs与水凝胶共培养,设计不含水凝胶的常规培养EPCs为空白对照组,0%、0.1wt%、0.5wt%、1.0wt%的 GO/CS 水凝胶组为实验组。通过 cck-8（cell countingkit-8,cck-8）实验测定水凝胶对细胞增殖活性的影响,采用乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）毒性实验测定细胞毒性,并通过死活细胞染色实验进一步验证水凝胶的细胞毒性。3.利用小管形成实验证实各组水凝胶对EPCs成血管功能的影响,并通过聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）,免疫印迹法（Westen Blot,WB）检测成血管相关基因及蛋白CD34,VEGF,MMP9和SDF-1表达,进一步探究其成血管相关机制。研究结果1.随着GO的加入,GO/CS水凝胶的内部结构发生了改变。而且GO浓度逐渐增加,水凝胶的孔径变小,孔隙率变大,拉伸强度和弹性模量也增强。2.CCK-8结果显示,GO浓度从0wt%增至0.5wt%时,细胞的增殖活性逐渐增强,但GO增至1.0wt%时明显抑制细胞的增殖活性。LDH毒性测定结果表明,当GO浓度低于0.5wt%时不会对细胞产生明显毒性,而且死活细胞染色流式结果进一步证实。3.在小管形成实验中证明,与空白对照组相比,0.5wt%GO/CS组的成小管效果最显著,1.0wt%GO/CS组抑制小管形成。qRT-PCR及WB结果论证0.5wt%GO组增强成血管基因及蛋白CD34,VEGF,MMP9和SDF-1表达,而1.0wt%GO组抑制表达。结论1.本实验证明GO的加入使CS水凝胶结构更加均匀、多孔、稳定,并且显著改善了其理化性能。2.适宜浓度的GO/CS水凝胶无明显的细胞毒性,且能促进EPCs增殖及提高其成血管能力。