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背景:前列腺癌（Prostate Cancer,PCa）是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤,其发病率在男性恶性肿瘤中居第二位,2020年全球约有140万例新发病例和37万例死亡病例。PCa早期缺乏特异性症状,导致我国大多数患者在确诊时已经发生转移,骨骼是最主要的转移部位,骨转移患者生存时间明显降低。PCa骨转移目前主要通过临床表现以及影像学检查确诊,但由于骨转移早期缺乏特异性临床表现、影像学变化及生化指标,常延误最佳诊断时机,因此寻找早期诊断和预测PCa骨转移的无创生物标记物成为目前研究的热点。外泌体作为一种微小膜泡,具有特殊的双层膜结构,保护RNA不受核酸酶的降解,目前已有大量文献报道外泌体miRNA在多种肿瘤中差异表达。外泌体miRNA的高稳定性及在肿瘤表达中的差异性意味着外泌体miRNA可能成为疾病诊断和预后监测有价值的非入侵生物标志物。因此,本研究主要从局限性PCa患者和骨转移患者外周静脉血外泌体中筛选差异表达的miRNAs分子,为PCa骨转移寻找新的生物标记物。目的:通过分析局限性PCa患者和骨转移患者血浆外泌体miRNAs水平变化,从中筛选差异表达的miRN As分子,评价其对PCa骨转移的诊断价值。方法:选取我院经前列腺穿刺确诊为PCa的患者46例,经骨扫描和磁共振检查,明确已经发生骨转移的患者33例,无转移的局限性患者13例。抽取术前空腹血10ml,使用高速离心法和试剂盒法提取血浆外泌体,应用透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析技术和流式细胞术对外泌体进行鉴定。运用高通量测序技术,对3例局限性PCa患者和3例骨转移PCa患者的血浆外泌体进行miRNA测序,初步筛选出具有差异的miRNAs分子。通过预实验结果、外泌体miRNA数据库表达情况及文献回顾等方法,选出最具有诊断意义的miRNAs分子。使用实时定量PCR技术对13例局限性PCa患者和33例骨转移患者进行验证,ROC曲线对表达量进行诊断效能分析。基于GEO基因数据库通过生物信息学方法进一步验证miRNA分子在PCa组织和血浆中的表达,结合靶基因富集分析及通路分析探究miRNA参与肿瘤的分子机制。结果:在电镜及纳米颗粒跟踪分析下,可见外泌体呈近似圆形的双层囊泡,直径在20nm-200nm范围内,符合外泌体的形态特征,流式细胞仪检测发现外泌体表面CD63和CD81两个特异性蛋白均有阳性信号。外泌体高通量测序结果显示,miRNA含量比例大于50%,miRNA表达量密度分布基本一致。在高通量测序结果中,和局限性PCa相比,骨转移患者中总共有61个miRNAs分子存在表达差异,包括30个高表达和31个低表达。根据预实验结果、外泌体miRNA数据库表达情况及文献回顾选取hsa-miR-130b-3p和hsa-miR-654-3p进行验证。RT-qPCR检测发现血浆外泌体hsa-miR-130b-3p在骨转移患者中高表达（1.00±0.07VS 1.94±0.26P=0.0069）,hsa-miR-654-3p在骨转移中低表达（1.37±0.23 VS 0.76±0.04 P=0.026）,差异均具有统计学意义。ROC曲线结果表明血浆外泌体hsa-miR-130b-3p和hsa-miR-654-3p用于诊断骨转移的曲线下面积（AUC）分别为0.76（95%CI=0.61-0.90）和0.72（95%CI=0.51-0.92）。GEO数据库验证发现,在PCa组织和血浆芯片中hsa-miR-130b-3p在转移性前列腺癌中（mPCa）高表达,hsa-miR-654-3p在mPCa中低表达,与实验结果一致,差异有统计学意义。miRNA靶基因功能分析显示,hsa-miR-130b-3p和hsa-miR-654-3p主要功能富集在蛋白质结合、RNA聚合酶Ⅱ启动子转录调控、细胞增殖调控、转录过程调控及转录调控区DNA结合等,与肿瘤细胞增殖侵袭密切相关。结论:1从PCa患者血浆中可提取结构完整,直径20nm-200nm的外泌体,表达CD63和CD81特异性表面标志物。2血浆外泌体RNA中miRNA的含量大于50%,局限性PCa组患者血浆外泌体和PCa骨转移组中的表达具有差异性。3血浆外泌体hsa-miR-130b-3p和外泌体hsa-miR-654-3p有作为诊断PCa骨转移生物学指标的潜在价值。4外泌体hsa-miR-130b-3p和hsa-miR-654-3p靶基因功能富集显示,与肿瘤细胞增殖侵袭密切相关。