论文部分内容阅读
蛋白质是日常生活中不可或缺的营养物质,其分离纯化过程的研究越来越受关注。分子印迹技术是对特定分子进行印迹,特异性筛选目标分子。本论文将分子印迹技术运用到蛋白质的分离纯化方面,以牛血清白蛋白(BSA)为模板分子,制备分子印迹膜和分子印迹中空磁性微球,并对其性能进行研究。1、选用功能化离子液体氯化1﹣乙烯基﹣3﹣氨基甲酰甲基咪唑([VAFMIM]Cl)为功能单体,磷酸缓冲溶液(PBS,pH7.2)为溶剂,N,N-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)为交联剂,过硫酸铵(APS)为引发剂,N,N,N,N-四甲基乙二胺(TEMED)为催化剂,采用冷冻聚合法合成了具有超大孔结构的牛血清白蛋白分子印迹膜(CP-MIM)。考察了不同实验条件对膜结合能力的影响,并对其吸附机理进行了研究。选用了卵清蛋白(OVA)、溶菌酶(Lys)和牛血红蛋白(BHb)为竞争蛋白来考察分子印迹膜对BSA的选择性。采用静态渗透和动态过滤试验对CP-MIM的印迹效果和分离效果进行考察。采用十二烷基硫酸钠凝胶电泳(SDS-PAGE)对实际样品进行了吸附研究。试验表明分子印迹膜对BSA具有特异性选择的效果。2、选用智能材料氯化1﹣乙烯基﹣3﹣氨基甲酰甲基咪唑离子液体([VAFMIM]Cl)、N-异丙基丙烯酰胺(NIPAm)和α-甲基丙烯酸(α-MAA)为多功能单体,三(羟甲基)氨基甲烷缓冲溶液(Tris-HCl,10mmol/L,pH7.0)为溶剂,N,N-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)为交联剂,过硫酸铵(APS)为引发剂,N,N,N,N-四甲基乙二胺(TEMED)为催化剂,制备了具有磁效应、温敏性、离子响应、pH响应等多重响应的牛血清白蛋白分子印迹中空磁性微球(HMIP);考察了不同实验条件下制备的磁性微球Fe3O4的形貌及特性;不同实验条件下对HMIP结合能力的影响,并对其吸附机理进行了研究;探讨HMIP多重响应的效果;选用了卵清蛋白(OVA)、溶菌酶(Lys)和牛血红蛋白(BHb)为竞争蛋白来考察HMIP对BSA的选择性。采用十二烷基硫酸钠凝胶电泳(SDS-PAGE)对实际样品进行了吸附研究。试验结果表明HMIP对BSA的分离纯化提出一种可行的办法。