Annexin V、Vimentin及MYL3在人子宫内膜异位症血瘀证中的表达和意义的实验研究

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目的:本课题来源于国家自然基金“子宫内膜异位症血瘀证的特异性蛋白组学研究”(编号:30973770),根据课题组前期蛋白组学研究已经得出阳性结果,采用免疫组化的方法研究膜联蛋白V (Annexin V)、波形蛋白(Vimentin)及肌球蛋白轻链3(Myosin light chain3)三个差异蛋白在子宫内膜异位症(Endometriosis, EMT)血瘀证、气滞血瘀证、肾虚血瘀证的在位内膜和异位子宫内膜及正常人子宫内膜中的表达。通过免疫组化研究进一步验证蛋白组学研究所得出的EMT血瘀证的特异性蛋白理论,揭示EMT血瘀证辨证的分子生物学基础;探讨Annexin V、Vimentin、MYL3与EMT发病的关系,寻找EMT证侯的辨治靶点,为中医辨证的客观化和标准化提供实验依据,以规范中医辨证,提高中医辨证治疗的准确性和临床疗效。方法:分别取6例子宫内膜异位症血瘀证、气滞血瘀证、,肾虚血瘀证患者增生期在位内膜和异位内膜组织及6例增生期正常子宫内膜组织标本,配对分为7组,采用免疫组织化学方法对Annexin V、Vimentin及MYL3在子宫内膜异位症患者在位内膜、异位内膜及正常子宫内膜组织间的表达差异进行了研究,检测以上指标在18例子宫内膜异位症血瘀证患者的在位内膜和异位内膜及6例增生期正常子宫内膜组织石蜡标本中的表达,对结果用Imagepro-Plus6.0软件测定IOD值,应用统计学方法对三个蛋白在子宫内膜异位症血瘀证、气滞血瘀证、肾虚血瘀证患者的在位内膜、异位内膜与正常组织间的表达差异进行分析。结果:(1)AnnexinV在血瘀证在位内膜组与血瘀证异位内膜组、肾虚血瘀异位内膜组中的表达有显著性差异,P值均小于0.05;与正常对照组相比,AnnexinV在子宫内膜异位症各个证型组的在位内膜及异位内膜组中均呈下调的表达,且组间P值均小于0.05,具有显著性差异。(2)与正常对照组相比,Vimentin在子宫内膜异位症各个证型组的在位内膜及异位内膜组中的表达均上调,且子宫内膜异位症各个证型的异位内膜组与正常对照组间存在显著差异;Vimentin在血瘀证异位内膜组中的表达与在血瘀证在位内膜组、肾虚血瘀在位内膜组、肾虚血瘀异位内膜组、气滞血瘀在位内膜组及正常对照组中的表达存在显著性差异,P值均小于0.05;(3)与正常对照组相比,MYL3在子宫内膜异位症各个证型的在位内膜及异位内膜组中均呈上调的表达;MYL3在子宫内膜异位症患者的各个证型的异位内膜组中的表达与正常对照组存在显著差异,P值均<0.05;MYL3在子宫内膜异位症各个证型组间的表达无明显差异,P值均>0.05。结论:(1)Annexin、Vimentin及MYL3可能与EMT的发病及病程进展存在一定的关系,进一步验证了三个蛋白为EMT的特异性蛋白标志物;(2)AnnexinV在血瘀证的在位内膜中与异位内膜中表达有显著性差异,可能为血瘀证的特异蛋白,但是在血瘀证及其相关复合证型中的表达无显著差异。Vimentin在血瘀证异位内膜中表达显著,除了气滞血瘀异位内膜组外,与其他5组间均存在显著差异,因此可能与EMT血瘀证的中医证型具有相关性,与血瘀证的发病机理可能有着重要的联系。(3)MYL3肌球蛋白在血瘀证及相关复合证型组中无明显差异表达,因此肌球蛋白轻链3可能不是EMT血瘀证的特异性蛋白。
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