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目的:Ig A肾病(Ig Anephropathy,Ig AN)是一种常见的原发性肾小球疾病,以肾脏免疫病理显示Ig A为主的免疫复合物在肾小球系膜区为特征。主要临床表现为血尿,可伴有不同程度的蛋白尿、高血压和肾脏功能受损,是导致终末期肾脏病常见的原发性肾小球疾病,10%~20%的成年患者在10年内进展为终末期肾病。大量研究表明中医药在本病的治疗中具有一定的优势。导师郭登洲教授根据“气阴两虚,兼有湿热”的病机,拟以益气养阴清热利湿方,临床上取得良好疗效。本实验通过研究该方对Ig AN大鼠肾脏的保护作用及其对B1受体、B2受体的影响,探寻其可能的作用机制。方法:健康清洁级雄性SD大鼠40只,体重140~160g,在温度20℃~24℃,相对湿度40%-60%的环境中,适应性饲养7天,第7天末检测尿蛋白阴性、潜血阴性者,依据体重将大鼠随机分为4组,即正常组、模型组、中药组和贝那普利组,每组各10只。参照汤颖[3]造模方法进行模型复制:牛血清白蛋白用蒸馏水配制成100g/L浓度,以剂量4ml/kg(400mg/Kg)给予灌胃,1次/隔日,一共持续42天;四氯化碳0.1ml+蓖麻油0.5ml皮下注射,1次/7天,一共持续63天;将脂多糖用氯化钠溶液调配,浓度为0.25g/L,于第42、56天尾静脉注射0.05mg(0.2ml)。正常组大鼠给予同等剂量的蒸馏水灌胃,1次/隔日,一共持续42天;皮下注射氯化钠溶液0.6ml,1次/7天,一共持续63天;第42、56天尾静脉注射氯化钠溶液0.2ml。模型复制成功后于第64天开始分别给予各组相应的药物干预,即:中药组给予益气养阴清利湿热中药灌胃,贝那普利组给予盐酸贝那普利灌胃。正常组、模型组均给予相应剂量的蒸馏水灌胃,一共持续56天。于第1天以及第50、64、92、120天检测各组大鼠的24小时尿蛋白定量(24 hours urinary total protein,24h-UTP)。实验结束后,处死大鼠,留取肾脏标本,行HE、Masson、PAS、PASM染色,免疫荧光法检测Ig A免疫复合物在大鼠肾脏的沉积情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组化法检测大鼠B1受体和B2受体的表达情况。结果:1 24小时尿蛋白定量的比较1.1同一时期各组大鼠24h-UTP的比较模型复制第1天:正常组、贝那普利组、中药组、模型组的24h-UTP均为阴性。第50天,贝那普利组、中药组、模型组的24h-UTP与正常组相比均明显升高,且具有显著差异(P<0.05),贝那普利组、中药组、模型组的24h-UTP比较无显著差异(P>0.05)。第64天,与正常组比较,贝那普利组、中药组、模型组的24h-UTP均明显升高,且具有显著差异(P<0.05),贝那普利组、中药组、模型组的24h-UTP比较无显著差异(P>0.05)。第92天,与正常组比较,贝那普利组、中药组、模型组的24h-UTP均明显升高,且具有显著差异(P<0.05);与模型组比较,贝那普利组、中药组的24h-UTP比均明显降低,且具有显著差异(P<0.05),贝那普利组、中药组的24h-UTP相比无显著差异(P>0.05)。第120天,与正常组比较,贝那普利组、中药组、模型组的24h-UTP均明显升高,具有显著差异(P<0.05);与模型组比较,贝那普利组、中药组的24h-UTP均明显降低,且具有显著差异(P<0.05),贝那普利组、中药组的24h-UTP相比无显著差异(P>0.05)。1.2同一组大鼠在不同时期的24h-UTP的比较正常组24h-UTP比较:造模开始第1天、第50、64、92、120天均无显著差异(P>0.05)。贝那普利组24h-UTP比较:第50天较造模开始第1天明显升高,且具有显著差异(P<0.05);第64天较第50天明显升高,且具有显著差异(P<0.05);第92、120天较第64天均明显降低,且具有显著差异(P<0.05);第120天较92天明显降低,且具有显著差异(P<0.05)。中药组24h-UTP比较:第50天较第1天明显升高,且具有显著差异(P<0.05);第64天较第50天明显升高,且具有显著差异(P<0.05);第92天、第120天较第64天均明显降低,且具有显著差异(P<0.05);第120天较第92天明显降低,且具有显著差异(P<0.05)。模型组24h-UTP比较:第50天较第1天明显升高,且具有显著差异(P<0.05);第64天较第50天明显升高,且具有显著差异(P<0.05);第64天、第92天、第120天相比较,无显著差异(P>0.05)。2光镜下肾脏病理学改变正常组:可见肾小球结构完整,肾小球系膜及基质无明显异常改变;模型组:可以见到系膜基质增多以及系膜细胞增生;贝那普利组与中药组虽有系膜基质增多以及系膜细胞增生,但较模型组减轻。3 Ig A免疫荧光在肾脏的表达情况正常组肾小球系膜区无免疫复合物沉积;而模型组的肾小球系膜可见免疫复合物呈颗粒状或团块状沉积。贝那普利组与中药组:肾小球系膜可见不同程度的免疫复合物沉积,但较模型组程度轻。4 B1受体在肾脏的表达情况:免疫组化:与正常组比较,中药组、贝那普利组、模型组的表达增强(P<0.05);与模型组比较,中药组、贝那普利组的表达减弱(P<0.05);中药组、贝那普利组组间无明显差异(P>0.05)。RT-PCR:与正常组比较,中药组、贝那普利组、模型组的表达明显增强(P<0.05);与模型组比较,中药组、贝那普利组的表达减弱(P<0.05);中药组、贝那普利组组间无明显差异(P>0.05)。5 B2受体在肾脏的表达情况免疫组化:与正常组比较,中药组、贝那普利组、模型组的表达增强(P<0.05);与模型组比较,中药组、贝那普利组的表达增强(P<0.05);中药组、贝那普利组组间无明显差异(P>0.05)。RT-PCR:与正常组比较,中药组、贝那普利组、模型组的表达明显增强(P<0.05);与模型组比较,中药组、贝那普利组的表达增强(P<0.05);中药组、贝那普利组两组间无明显差异(P>0.05)。结论:1益气养阴清利湿热方可以降低Ig A肾病大鼠的24小时尿蛋白定量。2益气养阴清利湿热中方可以下调缓激肽B1受体的表达,从而降低蛋白尿、保护肾脏。3益气养阴清利湿热中方可以上调缓激肽B2受体的表达,从而降低蛋白尿、保护肾脏。4益气养阴清利湿热方可以减轻Ig A肾病的肾脏病理学改变,从而延缓疾病进展。