Toll样受体7在HBV感染中作用及相关机制的研究

被引量 : 6次 | 上传用户:weishenmeme11
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
研究背景乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是一个全球性健康问题。部分人初次感染HBV后不能彻底清除病毒,成为慢性HBV携带者或慢性乙型肝炎患者,甚至发展为肝硬化,肝癌而严重危害人类健康。HBV持续感染与宿主的特异性免疫耐受、干扰素α产生水平低下,T细胞应答不足或浆细胞样树突状细胞减少及功能受损等现象相关,但其确切机制尚有待进一步研究。Toll样受体(TLR)是近年来发现的一类模式识别受体,通过对病原体相关分子模式(PAMP)的识别,在天然免疫和获得性免疫中起着重要桥梁的作用[1]。TLR7是TLR家族的重要成员之一,与其配体结合可以诱导干扰素、白介素和肿瘤坏死因子等细胞因子的产生,发挥抗病毒作用[2,3]。TLR7的激动剂咪喹莫特(IMQ/R-847))和艾沙托立宾(Loxribine的同类物),已分别用于皮肤癌和慢性丙型肝炎的治疗[4,5]。TLR7的另一配体Resiquimod(R-848)可以通过诱导IFN-α,IFN-β的产生显著抑制HBV的复制[2]。TLR7在抗病毒免疫作用中必不可少,而在慢性乙型肝炎患者的外周血单个核细胞TLR7表达显著降低[6]。然而,目前国内外关于HBV感染对TLR7表达调控影响的研究甚少,TLR7在乙型病毒性肝炎发病中的作用及机理尚不确定。本研究通过对TLR7介导的体外抗HBV作用和HBV转染对TLR7表达调控影响的研究,阐述TLR7在乙型病毒性肝炎发病中的作用。通过检测TLR7介导的慢性乙肝患者外周血单个核细胞产生IFN-α,IL-12含量的改变,探讨慢性HBV感染对免疫细胞TLR7功能的损伤及意义,阐述TLR7在慢性HBV感染中的作用及可能的机制,以期为TLRs介导的固有免疫的研究提供参考资料,为寻找治疗乙肝的新靶点和新药的开发提供初步实验依据。研究目的1.通过TLR7特异性配体Loxoribine刺激HepG2.2.15细胞株的研究,探讨TLR7介导的体外抗HBV作用及机制。2.通过检测TLR7特异性配体Loxoribine刺激HBV转染前后的HepG2和HepG2.2.15细胞株TLR7的表达,探讨HBV转染对TLR7表达及调控的影响,阐述TLR7在乙型病毒性肝炎发病中的作用。3.通过检测TLR7介导的慢性乙肝患者外周血单个核细胞产生IFN-α,IL-12含量的改变,探讨慢性HBV感染对免疫细胞TLR7功能的损伤及意义,阐述TLR7在慢性HBV感染中作用及机制。研究方法1.选用能稳定分泌HBV颗粒和HBV抗原标志物的HepG2.2.15细胞株为HBV转染的细胞模型,应用ELISA及实时荧光定量PCR法检测TLR7特异性配体Loxoribine对HepG2.2.15细胞HBsAg,HBeAg分泌和HBV DNA复制的抑制作用,探讨TLR7介导的体外抗HBV作用。2. MTT比色法检测TLR7特异性配体Loxoribine刺激对HepG2.2.15细胞的毒性作用。3.流式细胞术检测HepG2,HepG2.2.15细胞株胞内TLR7蛋白的表达水平,及特异性配体Loxoribine诱导对其表达调控的影响。4. ELISA法检测TLR7特异性配体Loxoribine刺激慢性HBV感染患者和健康人外周血单个核细胞产生IFN-α,IL-12含量的改变,评价慢性HBV感染对免疫细胞TLR7功能的影响。研究结果1.在TLR7特异性配体Loxoribine作用下,可有效抑制HepG2.2.15细胞HBsAg的分泌及HBV DNA的复制,对HBsAg分泌的抑制作用呈剂量和时间依赖性。对HBeAg的分泌无抑制作用。2.低浓度Loxoribine对HepG2.2.15细胞生长有一定抑制作用,但随着配体浓度增高,对细胞生长无明显毒性作用。3. HepG2和HepG2.2.15细胞胞内均有TLR7表达,但转染了HBV全基因组的HepG2.2.15细胞胞内TLR7的表达量明显低于未转染的HepG2细胞。TLR7特异性配体Loxoribine诱导后HepG2和HepG2.2.15细胞胞内TLR7表达量均有增加,但差异无统计学意义。4.乙肝病毒携带组及慢性乙肝患者组外周血单个核细胞培养上清液中IFN-α水平明显低于健康对照组;慢性乙肝患者组IL-12水平明显高于健康对照组;乙肝病毒携带组和慢性乙肝患者组间,PBMC培养上清液中IFN-α和IL-12水平无明显差异。5. TLR7特异性配体Loxoribine刺激培养后,健康对照组外周血单个核细胞培养上清液中IFN-α,IL-12水平显著升高,乙肝病毒携带组及慢性乙肝患者组IFN-α,IL-12水平亦均有升高,但差异无统计学意义。结论1.特异性配体Loxoribine有较显著的抗HBV作用,其对HBV的抑制可能是TLR7介导作用于病毒复制及蛋白合成等环节。2. HBV感染抑制了TLR7的表达,特异性配体Loxoribine诱导则可发挥显著的抗HBV作用,即TLR7表达下调可能参与了乙型病毒性肝炎的发病。3.慢性HBV感染患者外周血单个核细胞TLR7功能受损,INF-α产生水平低下, IL-12调节功能紊乱,这可能是导致HBV持续感染的重要原因。
其他文献
  本试验以潍县萝卜为试材,于三叶期喷施不同浓度的烯效唑、ABA、MH和CCC四种植物生长调节剂,调查现蕾率、抽薹率,并测定叶片可溶性总糖、蛋白含量及C/N的变化。结果表明:每隔
感觉记忆能够以特征形式构建对视觉对象表面信息的表征,然而对于具有重要意义的潜在抽象信息,尚未有研究考察其是否影响感觉记忆的视觉表征。结合掩蔽技术与部分报告法范式考
宋代梁楷的《泼墨仙人图》是中国美术史上的经典之作,是我们今天进行水墨人物画创作的重要参照。文章以《泼墨仙人图》中的人物造型为研究对象,首先对其面部造型和身体造型的
作为20世纪中国文坛最伟大的著作之一,《围城》对整个文学界都有着十分重要的意义,而其英文翻译版本以珍妮凯利译本最为出名,也是最成功的版本之一。小说中充斥着各种外语词
超短波通信以其优良的信道特性和通信质量,在无线通信中占据重要地位,被广泛应用于军事和民用领域,无中心通信系统是超短波通信的一个典型应用,与单纯的对讲机系统相比,其拥有集群
透过粘接界面的超声波在传播过程中会产生超声非线性现象,该现象可以用非线性系数来表征,通过超声无损检测试验手段可以测量得到非线性系数,进而可以预测粘接界面的力学性能
目的 探讨头颈部横纹肌肉瘤的临床特点、诊断、治疗及预后。方法 回顾分析我院 1993年 2月~1999年 3月收治的 12例头颈部横纹肌肉瘤患者的临床资料。结果 11例获得随访, 5
当前,对于心理学的研究已经向积极心理学发展,在理念与本质上,积极心理学的功能与思政教育的功能具有一定的互通性,而思政教育对于社会群体向国家及社会需求的方向发展意义重
目的探讨桂枝茯苓胶囊对慢性盆腔炎的治疗作用,并对比观察中西医结合治疗的临床疗效。方法选取2010年3月至2011年3月于我部门门诊就诊的慢性盆腔炎共计120例,随机分成3组:治
【妙语"三国"】●刘备第一能哭,第二能跑,而且跑得时候连老婆也不要。●人们常讲"冷静,冷静",诸葛亮的一把羽毛扇子,据说就是起这个作用的。●两军对垒,两个将军出列,照例先