AAV-2是目前人类临床研究中最有前途的基因治疗载体之一。本论文报道了重组腺相关病毒rAAV-2的包装生产、纯化、检测方法即生产平台的建立及初步应用。利用重组质粒pAAV／EGFP与包装／帮助质粒pDG共转染人胚肾细胞HEK293，生产重组的AAV病毒。纯化后的病毒基于pAAV上的WPRE序列建立定量Realtime-PCR方法检测rAAV滴度。结果显示：与传统的检测AAV滴度的方法相比，qRealtime-PCR方法更为方便、快速、通用，而且提高了重复性和准确性。使用两种不同的纯化方法—1)肝素柱纯化法；2)氯仿纯化法—纯化粗产物获得纯度较高的重组腺相关病毒rAAV。比较二种方法：从两种方法纯化得来的重组腺相关病毒rAAV分别以不同滴度感染HEK293，观察EGFP的表达。结果显示：从感染活性看，两种方法的纯化产物活性相近；从经济、简便、省时方面看，氯仿纯化法优于肝素柱纯化法。 应用RT-PCR技术从肝癌病人血细胞中扩增出能够表达IFNa1的IFNA1cDNA，克隆到pAAV载体上进行测序，构建了重组质粒pAAV／IFNA1，转染HEK293细胞，48小时后收获细胞，Western blotting检测发现约20kD的条带，证明IFNA1基因得到正确表达。用所建立的方法生产、滴定rAAV／IFNA1病毒。所获得的重组病毒以不同M．O．I感染含HBV的AD38细胞，过夜培养约16小时后，释放AD38内的HBV，收获AD38细胞培养液，qRealtime-PCR法检测其中HBV(HBV基因组内含WPRE元件)含量，同时用重组AAV／EGFP病毒做对照。结果显示：感染rAAV／IFNA1病毒的细胞培养液内所含HBV的量逐渐减少，而感染rAAV／EGFP病毒的细胞培养液内所含HBV则在24小时内持续增加。说明用AAV介导IFNa1能够抑制AD38细胞内HBv的复制，为下一步进行动物试验典定了基础，这对于肝癌治疗研究有重要的参考意义和现实意义。 这一AAv生产平台的建立，不仅可以用于传递任Nal治疗肝癌，也可高效传送各种治疗基因进行动物实验，研究人各种遗传性疾病、慢性难治病以及癌症的基因治疗，同时对于疫苗的研究开发也具有重要的现实意义。