【摘 要】
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精液超低温冷冻保存的过程造成了精子致死或亚致死损伤,影响动物人工授精时的受孕率,但绵羊精子冷冻保存损伤机制尚不清楚。本研究对杜泊羊新鲜精子和冻融精子各项生理指标分析的同时,应用TMT（Tandem Mass Tag）标记结合高效液相色谱串联质谱技术（HPLC-MS）鉴定杜泊羊新鲜精液组和冻融精液组差异蛋白质。研究结果如下:1新鲜精子组（F组）和冻融精子组（FT组）相比,精子活率,精子质膜完整率,顶
【基金项目】
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国家重点研发计划（2018YFD0502000）; 国家现代农业产业技术体系专项基金（CARS-38）
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精液超低温冷冻保存的过程造成了精子致死或亚致死损伤,影响动物人工授精时的受孕率,但绵羊精子冷冻保存损伤机制尚不清楚。本研究对杜泊羊新鲜精子和冻融精子各项生理指标分析的同时,应用TMT（Tandem Mass Tag）标记结合高效液相色谱串联质谱技术（HPLC-MS）鉴定杜泊羊新鲜精液组和冻融精液组差异蛋白质。研究结果如下:1新鲜精子组（F组）和冻融精子组（FT组）相比,精子活率,精子质膜完整率,顶体完整性,平均速度,振动指数差异均极显著。新鲜精子直线速度与冻融精子组精子直线速度相比差异不显著。2本研究共鉴定2039个蛋白,定量2024个蛋白。1.5倍为差异变化阈值,发现365个差异蛋白,其中63个上调,302个下调。3通过对杜泊羊冻融前后精子差异蛋白质进行分子生物信息学分析发现:（1）GO注释分析中主要参与发生物学过程GO分析为:细胞过程、代谢过程、单生物体过程等。细胞组成GO分析主要为:细胞内、细胞器和膜。分子功能GO分析主要为:结合功能和催化功能。（2）KEGG通路分析发现,差异蛋白质主要参与生热作用、氧化磷酸化、帕金森病、亨廷顿病、阿尔茨海默病五种生物学通路。（3）通过对差异表达蛋白互作网络分析发现,泛醌氧化还原酶亚基B6（NDUFB6）、ATP酶偶联因子6（ATP5PF）、蛋白酶体26S非ATP酶亚基4（PSMD4）和TCP-1复合物（CCT8）相对于其他蛋白处于核心位置。4挑选出14个差异表达蛋白进行PRM验证,结果表明PRM定量到蛋白表达丰度和TMT分析中记录的蛋白丰度变化基本一致。综上所述,热休克蛋白90ab1（HSP90ab1）、TCP-1复合物（CCT8）、钙蛋白酶11（CAPN11）、纤维蛋白原样蛋白2（FGL2）等10种蛋白质在精子冷冻保存过程中发挥较大作用。蛋白酶体26S非ATP酶亚基4（PSMD4）、TCP-1复合物（CCT8）、基质金属蛋白酶2（MMP2）、钙蛋白酶11（CAPN11）相关蛋白在差异显著蛋白中所占比例较大,这些蛋白的改变可能会影响冷冻保存精液的质量,降低精子的受精能力,初步实验结果为进一步提高绵羊精子的低温贮藏效果提供参考。
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