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目的:阿尔茨海默症(Alzheimer’sDiseases,AD)是最常见的和衰老相关的痴呆。目前世界人口逐渐老龄化,AD患者越来越多,然而却没有很好的药物,可以治愈AD。甲钴胺作为维生素B12在哺乳动物体内的活性形式之一,临床上用于治疗神经性疾病,并报道有维持老年人认知功能的效果。本实验的目的是研究甲钻胺对AD模型细胞的作用,观察其是否能减轻淀粉样蛋白(beta amyloid,Aβ)引起的神经毒性,以期对AD的治疗有所用。实验方法:采用25μM的Aβ25-35处理PC12神经细胞24h,建立AD细胞模型,考察4个不同浓度甲钴胺对细胞的保护作用。再通过检测细胞活力,细胞活性氧水平,线粒体钙浓度,线粒体膜电位,以及细胞凋亡和与此相关的基因,蛋白的变化,观察验证甲钴胺对Aβ25-35诱导的细胞毒性的保护作用。实验结果:不同浓度的甲钴胺都能增加因Aβ25-35毒性而降低的细胞活力,在1μM的时候效果最为明显;活性氧检测发现细胞经过Aβ25-35处理后,活性氧水平升高,在甲钴胺加入后,各个浓度都有明显下降;在Aβ25-35处理24h后,线粒体钙水平上升,细胞线粒体膜电位下降明显,而施加甲钴胺后,线粒体钙水平下降,线粒体膜电位回升;通过经典的AnnexinV/PI双染色检测细胞凋亡情况发现,在Aβ25-35处理24h后,细胞早期凋亡比例升高,而经甲钴胺处理后,凋亡的比例减少;通过qRT-PCR 检测了mfn2,gsr,akt bcl2,bax等 mRNA 表达,发现mfn2,gsr,akt的 mRNA在Aβ25-35处理24h后,都有所降低,而甲钴胺回复了它们的水平,bax/bcl2的比值可以反映细胞的凋亡情况。在给予甲钴胺后,bax/bcl2的比值明显下降;而用Western blot 检测 cleaved Caspase-3,p-Akt,PGC-1α 的蛋白水平,其中 p-Akt 在Aβ25-35处理表达下降,而cleaved Caspase-3表达上升,PGC-1α表达下降,给予甲钴胺后则改善这些变化。结论:实验结果表明,Aβ25-35可对细胞造成活性氧和钙水平升高,并降低线粒体膜电位,从而引起细胞凋亡。而甲钴胺可降低这些损伤以及后续的细胞凋亡比例,说明甲钴胺的确可以对这种神经毒性有缓解作用。