论文部分内容阅读
目的:本研究旨在观察降钙素(calcitonin,CT)对白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)诱导后大鼠早期骨性关节炎(osteoarthritis,OA)体外模型关节软骨细胞的丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路中的细胞外信号调节激酶(extracell-ular sigal-regulated protein kinase,ERK)和p38激酶(p38 kinase,p38)及其磷酸化水平和基质金属蛋白酶-13 (matrix metalloproteinase-13,MMP-13)表达的影响,探讨CT是否可以通过影响MAPKs信号通路蛋白的激活进而减少MMP-13产生,从而对OA软骨细胞损伤起到一定的预防作用。方法:1.软骨细胞的培养及鉴定:取健康SPF级1月龄Sprague-Dawley(SD)大鼠的膝关节表面软骨组织,经消化后培养软骨细胞。采用甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,ColⅡ)免疫细胞化学方法鉴定软骨细胞。2.第2代软骨细胞在融合后分为6组:空白组(A组);给予DMEM培养液24h15min;IL-1β组(B组):先给予DMEM培养基24h后再加入10ng/mlIL-1β15min;CT低剂量预防组(C组):先给予含CT50ng/ml DMEM培养基24h后再加入10ng/mlIL-1β15min;CT高剂量预防组(D组) :先给予含CT500ng/mlDMEM培养基24h后再加入10ng/mlIL-1β15min;CT低剂量对照组(E组):给予含CT50ng/ml DMEM培养基24h15min ;CT高剂量对照组(F组):给予含CT500ng/mlDMEM培养基24h15min。免疫细胞化学方法和Western blot方法分别检测各组中MAPKs通路中的ERK和p38激酶及其磷酸化水平和MMP-13的表达情况。采用ANOVA方差分析进行组间均数比较,两两比较采用SNK检验,以P<0.05表示差异有统计学意义。结果:1.甲苯胺蓝染色:培养细胞呈异染性,证明培养的细胞为软骨细胞。2.用免疫细胞化学方法检测ColⅡ,培养细胞胞浆出现较强的棕黄色颗粒,证明培养的细胞为软骨细胞。3.免疫细胞化学结果:3.1 ERK1/2和P38 IOD值:各组ERK1/2和P38 IOD值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3.2 p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 IOD值:B组p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 IOD值高于其它各组,差异有统计学意义(P<0.05);C,D组p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 IOD值低于B组而高于A,E,F组,差异有统计学意义(P<0.05);C,D组之间p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 IOD值比较,差异无统计学意义(P>0.05);A,E和F组之间p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 IOD值分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。4. Western blot结果:4.1 ERK1/2和P38 OD值:各组ERK1/2和P38 OD值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4.2 p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 OD值:B组p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 OD值高于其它各组,差异有统计学意义(P<0.05);C,D组p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 OD值分别低于B组而高于A,E,F组,差异有统计学意义(P<0.05);C,D组之间p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 OD值比较,差异无统计学意义(P>0.05);A,E和F组之间p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 OD值分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:降钙素可能通过部分抑制IL-1β诱导的大鼠膝关节软骨细胞中MAPKs通路相关蛋白激酶中ERK1/2和P38的激活,同时下调MMP-13的表达,对OA软骨细胞的损伤起到一定的预防作用。