背景与目的:生育力问题已经成为世界性的健康问题。由于导致生育力下降的原因复杂,机制不明确,这种趋势与日俱增。应激对女性生育力造成不良的影响。流行病学调查发现,急慢性压力能够降低卵母细胞的获取率、受精率、妊娠率及活胎娩出率,同时也能降低新生儿出生体重。此外,与具有正常妊娠能力的女性相比,不孕女性往往具有多疑,易内疚自责及易激动等性格特征,这些女性体内血清泌乳素及皮质醇水平也较高。慢性束缚性应激小鼠模型是常用的研究压力与健康问题的动物模型。本课题组前期动物实验发现,慢性应激会导致小鼠的卵巢原始卵泡的过度激活,可能导致卵巢储备功能下降。但慢性应激与卵母细胞质量的相关性目前尚未明确。卵母细胞的质量决定卵母细胞的发育潜能,主要表现在卵母细胞发育过程中胞质与胞核的发育成熟等重要事件的顺利进行,其中胞核发育包括生发泡的破裂、纺锤体形成和染色体的分离等。有研究发现排卵前急性应激可通过影响卵母细胞纺锤体的形成以及染色体的分离降低卵母细胞的质量,从而降低卵母细胞发育潜能。在现实生活中,人们不仅受到短期急性应激事件的影响,往往更多的是受慢性应激的威胁。但是,慢性应激是否影响卵母细胞的成熟及发育潜能以及如何影响仍然不清楚。本研究拟通过构建慢性束缚性应激小鼠模型模拟慢性生活应激对卵母细胞核成熟的影响。旨在探索慢性压力对卵母细胞质量的影响及其可能机制。第一部分:慢性应激通过APC/C介导的CCNB1蛋白的降解干扰小鼠卵母细胞减数分裂激活在辅助生殖技术中,卵母细胞生发泡的及时破裂与卵裂率及囊胚形成率明显相关。然而,慢性应激是否通过干扰卵母细胞生发泡的破裂来降低卵母细胞质量及其机制仍然不清楚。我们采用慢性束缚性应激小鼠模型探索慢性应激对卵母细胞减数分裂激活的影响及其作用机制。4周的慢性束缚性应激后,与正常对照组相比,应激组小鼠卵母细胞异常染色体的比例明显增高,说明慢性应激降低了小鼠卵母细胞发育潜能。同时,应激组小鼠的卵母细胞生发泡破裂百分比降低,发生生发泡破裂所需的平均时间延长。进一步探究发现慢性应激组小鼠卵母细胞cyclin B1(CCNB1)的表达明显下降。CCNB1作为成熟促进因子(maturation promoting factor,MPF)的调节性亚基,在卵母细胞减数分裂激活过程中发挥重要作用,其活性主要受泛素连接酶后期促进复合物(anaphase-promoting complex/cyclosome,APC/C)介导的降解性调节。在体外,我们使用APC/C的抑制剂,MG132,作用于应激组小鼠的卵母细胞后,其生发泡的破裂时间明显恢复,并与正常对照组无显著差别。同时,MG132处理后的应激组小鼠卵母细胞CCNB1含量明显上升。因此,我们的研究结果表明,慢性压力能够通过促进APC/C介导的CCNB1蛋白降解干扰卵母细胞减数分裂的激活。此研究为慢性应激引起卵母细胞质量下降提供较新的理解,同时为临床上筛选高质量卵母细胞提供一种无创性方法及为压力相关的低卵母细胞质量所致的不孕症提供新的分子治疗靶点及思路。第二部分:慢性应激导致小鼠卵母细胞纺锤体组装检查点SAC缺失,参与了姐妹染色单体连接异常的发生排卵后的卵母细胞捕获于第二次减数分裂中期(metaphase II,MII)。完整的姐妹染色单体的连接是MII具有充分潜能完成受精及形成正常胚胎的必备条件。慢性压力降低女性的生育力,那么它是否通过影响MII期卵母细胞染色体的分离降低卵母细胞的发育潜能及其机制尚不清楚。MII期卵母细胞姐妹染色单体之间的连接由securin抑制分离蛋白酶的作用维持。慢性应激后,与对照组相比,应激组染色体排列散布,姐妹染色单体着丝粒之间的距离明显增大。同时,在应激组MII卵母细胞中,securin蛋白含量明显下降。应激后,泛素连接酶后期促进复合物(anaphase-promoting complex/cyclosome,APC/C)上游抑制因子纺锤体组装检查点(spindle assembly checkpoint,SAC)蛋白酶组成成分Mad2明显下调。因此,我们的研究结果表明,慢性应激通过干扰卵母细胞姐妹染色单体之间的连接,降低卵母细胞的发育潜能。SAC-APC/C轴异常所致的securin的降解增加可能参与了慢性应激所致的卵母细胞染色体连接异常。