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GPx5是谷胱甘肽过氧化物酶家族(GPxs)中的第五种酶,它的活性中心是由半胱氨酸取代了硒代半胱氨酸,是一种分泌性蛋白。GPx5主要作用是保护精子的完整性,使精子不被氧化,它对精子在附睾中的成熟起着关键作用。鉴于GPx5的重要作用,,本试验以绵羊附睾头为试验样品,应用RT-PCR技术对绵羊GPx5基因进行克隆,在得到编码区全序列的基础上分析其蛋白的理化性质,采用Real-time PCR技术探讨不同营养水平下绵羊附睾头中GPx5mRNA的表达规律,并用免疫荧光技术对附睾头中GPx5进行定位研究,检测其在不同营养水平下基因和蛋白表达水平。旨在从分子水平探索GPx5与雄性动物繁殖功能的关系,为进一步研究GPx5在雄性动物生殖发育和繁殖功能的调控机制方面提供理论依据。主要试验结果如下：(1)克隆了长度为1384bp的绵羊GPx5基因编码区的全序列,提交至GenBank数据库,收录号为JQ320282.1。所得的序列包括660bp的编码区序列,共编码219个氨基酸,蛋白质的相对分子量为25kD,等电点为7.723。(2)通过绵羊与牛、猪、狗、鼠、人的GPx5基因编码区序列比对,基因序列的相似性分别为96.67%、88.94%、82.43%、80.18%、32.13%,绵羊与牛的相似性最高；生物信息学分析得到绵羊GPx5整个多肽链表现为亲水性；GPx5蛋白的氨基酸序列在第21和第22之间存在信号肽位点,是分泌性蛋白；GPx5蛋白的22个氨基酸处存在1个N-糖基化位点,没有O-糖基化位点,并且GPx5蛋白的24、163、168和203位点丝氨酸,21、37、200和204位点苏氨酸,以及31、119和126位点酪氨酸,可能被磷酸化；GPx5蛋白质二级结构中有α-螺旋、p-折叠、Turn转角和Coil卷曲,其所占的比例依次为41.1%、36.1%、10.0%和12.8%；GPx5在蛋白分子系统进化同源性中,绵羊GPx5和牛的同源性最高,亲缘关系最近。(3)Real-time PCR技术检测到绵羊GPx5mRNA在不同营养水平下具有表达差异性,表达特点为：自由采食组>65%VFI组＞35%VFI组。利用免疫荧光技术对绵羊附睾头组织中的GPx5进行了表达定位,结果显示,在绵羊附睾头组织的上皮细胞边缘检测到表达信号,并随着营养水平的提高表达量呈逐渐增高的趋势。