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众所周知,对于人类危害十分严重的食源性致病菌之一的金黄色葡萄球菌(金葡菌),不仅能够引发人们食物中毒,甚至还能诱发多种致死性感染疾病,给人们生命安全带来了严重威胁。据研究表明,金葡菌致病性最主要原因是其能够分泌多种毒力蛋白,例如α-溶血素,肠毒素A(SEA)和肠毒素B(SEB)。其中α-溶血素是最重要的毒力因子。盐酸小檗碱作为一种化学结构十分明确的天然化合物,是从罗汉松中提取出来的一类有着极强生物活性的异喹啉类生物碱。据之前报道表明,盐酸小檗碱可以控制住某些病原体的扩散。但目前关于盐酸小檗碱对金葡菌α-溶血素,SEA和SEB的抑制作用效果并无文献报道。本论文在查阅国内外文献的基础上,针对盐酸小檗碱对于金葡菌抑菌机制和对由α-溶血素引起氧化损伤模型影响,开展以下三方面研究工作:(1)研究了盐酸小檗碱对金葡菌活性研究以及盐酸小檗碱对金葡菌细胞膜的抑制作用。实验结果表明,盐酸小檗碱对金葡菌MIC是128μg/mL。通过测定了盐酸小檗碱不同浓度、不同作用时间下金葡菌的生长情况,反映了盐酸小檗碱对金葡菌的作用情况。通过纸片扩散法考察了盐酸小檗碱对金葡菌生长的抑制效果,表明在128μg时抑制作用最强且呈剂量依赖性。另外,通过浓度为0μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、64μg/mL的盐酸小檗碱对金葡菌菌悬液紫外吸收值的测定以及内膜通透性实验,表明盐酸小檗碱为对金葡菌β-半乳糖苷酶的产生具有抑制作用,在64μg/mL时细胞膜破坏程度最高。扫描电镜实验观察到盐酸小檗碱以不同时间作用于细菌时,细胞发生扭曲变形。随着时间延长为3h时,细胞表面凹凸不平甚至肿胀,使营养物质和遗传物质泄露。(2)研究盐酸小檗碱对金葡菌分泌α-溶血素、SEA和SEB这三种毒力因子的作用机制。溶血试验表明,相比于空白组,当加入浓度为8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、64μg/mL盐酸小檗碱作用时,溶血比例分别降低为81.1%、68.01%、36.61%、8.34%,同时盐酸小檗碱对金葡菌上清液溶血抑制呈明显剂量依赖性。蛋白免疫印迹法表明亚抑菌浓度下盐酸小檗碱能够有效抑制α-溶血素,SEA和SEB分泌,并具有剂量依赖性。ELISA法测定出在不同浓度盐酸小檗碱作用下,肝细胞L02中的细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β释放量逐渐减少。(3)研究了盐酸小檗碱对α-溶血素诱导肝细胞L02的氧化损伤的抑制作用。首先,MTT法检测对照组、α-溶血素组、低剂量盐酸小檗碱+α-溶血素组、中剂量盐酸小檗碱+α-溶血素组、高剂量盐酸小檗碱+α-溶血素组细胞增值活性的影响。接着测定了MDA以及抗氧化酶系SOD、GSH-Px的活力情况,研究表明盐酸小檗碱能够抑制α-溶血素诱导肝细胞L02所引起的氧化损伤,且抑制作用呈剂量依赖性。最后进行流式细胞术检测ROS的产生以及线粒体膜电位的变化情况,进一步确定盐酸小檗碱对其的抑制作用。由实验结果分析出,盐酸小檗碱对金葡菌所分泌的这三种毒素作用效果以及对α-溶血素诱导氧化损伤抑制作用。因此,本文为盐酸小檗碱作为潜在的抗菌抗毒素化合物在食品和制药工业领域的研发提供理论依据。