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芽孢菌是奶粉中常见的污染菌，严重影响着产品品质，嗜热脂肪地芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌同时也是炼乳等罐头食品中常见的平酸腐败菌。耐热芽孢菌能够产生大量的蛋白酶、脂肪酶等各种酶类，降低食品的感官品质与营养价值。同时这些微生物还能间接反应食品生产车间的卫生状况，因此，对这些耐热芽孢菌的快速检测及消毒具有重要研究意义。环介导等温扩增技术（LAMP）是一种新型核酸扩增技术，利用4条特异性引物，选择性地使用环引物，可以实现核酸的快速特异性扩增。该技术不需要昂贵的PCR仪，仅仅在恒温条件下就能完成扩增，检测结果特异性高，反应高效，操作方便，可以广泛应用于微生物核酸的快速检测。本研究对哈尔滨周边某工厂的奶粉样中进行耐热菌的分离鉴定，得到一株耐热芽孢菌，命名为KLDS9.1101。对其进行显微镜观察、培养、生长曲线测定，确定其为革兰氏阳性，最适生长温度为55℃，经16S rDNA分子鉴定，属于好热黄无氧芽孢菌。本课题研究对好热黄无氧芽孢菌、嗜热脂肪地芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌的spo0A基因进行比对，以spo0A基因部分片段为靶基因设计出了LAMP引物。通过培养，提取出菌体DNA作为反应模板。对LAMP反应的温度、甜菜碱浓度、dNTPs浓度以及Mg2+浓度等进行了优化。最后确定LAMP扩增最优体系为：内引物FIP和BIP各1.6μmol/L、外引物F3和B3各0.2μmol/L、环引物LB和LF各0.8μmol/L，2.5μL10×buffer，0.6mol/L甜菜碱，1mmol/L dNTPs，8mmol/L MgSO4，2μL模板，用ddH2O补足24ul；95℃预处理5min冷却后，再加入1μL BstDNA聚合酶8U，63℃下恒温扩增30~60min，最后在80℃下加热10min使酶失活。扩增产物可以采用凝胶电泳、HNB和钙黄绿素进行结果检测，阳性变化明显，可以清晰判断是否发生扩增。将常见芽孢杆菌的DNA提取物作为LAMP反应模板，进行LAMP特异性和灵敏度的验证。结果表明，只有好热黄无氧芽孢菌、嗜热脂肪地芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌的提取物发生了扩增，其余均未扩增，表明spo0A基因的选择和引物设计良好。灵敏度试验表明，检测限能够达到8CFU/mL。LAMP检测法特异性强，高效迅速，与传统平板计数法相比更高效省力，与普通PCR法相比灵敏度更高，不需要昂贵PCR仪设备。利用过氧乙酸作为消毒剂，好热黄无氧芽孢菌为试验菌株进行消毒试验，0.3gNa2S2O3+100mL PBS作为中和剂，试验结果表明，过氧乙酸消毒作用良好，在200mg/L的过氧乙酸消毒液中，浸泡清洗3min以上，可以使杀菌对数值达到6以上，便可达到消毒目的。综上所述，LAMP方法可以用于食品中好热黄无氧芽孢菌、嗜热脂肪地芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌的快速检测，采用过氧乙酸溶液作为消毒剂可以有效地对好热黄无氧芽孢菌为代表的耐热芽孢菌进行消毒。