EB病毒(EBV)为线性双链DNA(dsDNA)病毒,主要潜伏感染B淋巴细胞,人群普遍易感。与EBV感染有关的疾病包括传染性单核细胞增多症、伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、鼻咽癌等。血清学检测是临床诊断EBV感染的常规手段,但该方法检测率低、假阳性结果高。核酸分析兼具灵敏度高和特异性强的优点,临床检测病毒核酸可及时反映病毒感染以及病毒复制情况,目前,荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)是EBV核酸检测的最常用方法,但该方法仍需复杂标记和高精度热循环以及严格的实验条件,限制其在基层医疗单位的推广应用。因此,本工作基于银纳米复合物的高导电性和强氧化还原能力以及酶辅助靶标循环反应的信号放大效应,设计了一种简单、等温的电化学传感检测新方法,用于免标记、超灵敏检测EBV相关基因。本工作以聚酰胺-胺树枝状聚合物封装的银纳米复合物(AgDNCs)、DNA封装的银纳米簇(DNA/AgNCs)以及DNA探针(pDNA)组成的共聚物作为双模板增强型信号标签(pDNAAgDNCs@DNA/AgNCs共聚物),利用银自身强大的电子氧化能力直接产生电化学信号,无需标记生物酶。依据Lambda核酸外切酶(λexo)的非经典性质设计非经典λexo辅助靶标循环(LNTR)体系,无需磷酸化的DNA底物。LNTR反应可由靶DNA特异地触发,循环靶DNA并释放大量的单链DNA(ssDNA)产物,ssDNA产物结合至电极表面后进一步与信号标签结合。由于银纳米复合物强大的导电性和LNTR的循环放大能力,电化学信号显著增强。所建立的电化学生物传感器可免标记、超灵敏的检测靶DNA,线性范围为1 fM-1 nM,最低检测限为0.38 fM。此外,该方法具有高特异性,并成功用于分析复杂生物基质中的靶DNA。所建立的电化学生物传感策略无需复杂标记和热循环过程,方法简单、高效,为EBV感染的早期诊断提供有力技术支持,并有望为肿瘤等重大疾病的预测与筛查、病原菌检测及生物医学研究提供潜在应用工具。