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Fc受体(Fc receptor, FcR)是一类能特异亲和免疫球蛋白Fc区域的免疫细胞表面分子。Fc受体通过与配体结合可触发和调控机体多种免疫学效应,是机体体液免疫与细胞免疫间的联系纽带,在机体免疫防御中起着极其关键的作用。为研究猪FcγR III的生物学功能及其介导的免疫学反应,本研究利用RT-PCR技术从猪肺巨噬细胞总RNA中克隆出猪FcγR III及其附属蛋白β亚单位、γ亚单位cDNA序列,并进行了同源性分析。结果显示所获得FcγR III、β亚单位、γ亚单位与参考序列AF372453、AF525403、AF148221的核苷酸序列同源性分别为99.9%、99.5%、100%。将编码猪FcγR III、FcγR III胞外区和γ亚单位的基因片段亚克隆到原核表达载体pET-32a中,分别构建了重组表达质粒pET-SFR1、pET- SFR2和pET-SFRγ。三个重组质粒在IPTG的诱导下成功表达了FcγR III重组蛋白(SFR1-His)、FcγR III胞外区重组蛋白(SFR2-His)和γ亚单位重组蛋白(SFRγ-His),分子量大小分别约为48KDa、43KDa和29KDa,与预期结果相符;SFR1-His和SFR2-His重组蛋白以包涵体的形式存在,而SFRγ-His以可溶性形式存在。用尿素法对SFR1-His和SFR2-His重组蛋白包涵体进行纯化;通过透析法对纯化的重组蛋白进行复性,使目的蛋白纯度分别达到87%和83%。应用镍琼脂糖凝胶树脂层析柱纯化SFRγ-His重组蛋白,可使目的蛋白纯度达到92%。将重组蛋白SFR1-His、SFR1-His和SFRγ-His免疫小白鼠,制备鼠抗SFR1-His、SFR2-His和SFRγ-His重组蛋白的多克隆抗体,用间接ELISA和免疫印迹法检测获得的多克隆抗体。ELISA测定多克隆抗体的效价分别为1:16000、1:16000和1:8000。免疫印迹分析结果显示制备的多克隆抗体可以与重组蛋白特异性结合,表明重组蛋白具有较好的免疫原性。间接ELISA和免疫印迹分析结果表明重组蛋白多克隆抗体制备成功。将编码猪FcγR III、γ亚单位基因片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.0中分别构建pcDNA-SFR1和pcDNA-SFRγ表达载体,运用脂质体转染方法将pcDNA-SFR1单转染COS-7细胞,pcDNA-SFR1和pcDNA-SFRγ共转染COS-7细胞,以空载体pcDNA3.0转染COS-7细胞作为阴性对照。转染后48h用流式细胞术和免疫球蛋白结合试验检测目的蛋白在COS-7细胞上的表达。试验结果表明,在单转染和共转染的COS-7细胞膜表面均未检测到目的蛋白的表达。猪FcγR III在细胞膜表面的表达可能还需要其它附属蛋白的辅助。