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目的:研究VEGF和受体FLT-1、FLK-1在大肠癌组织中的表达和临床病理因素之间的关系;观察siRNA干扰VEGF基因对不同分化人大肠癌细胞系生物学特性的影响。方法:应用免疫组织化学S–P法,检测82例大肠癌及14例大肠正常黏膜组织中VEGF和FLT-1、FLK-1的表达,分析大肠癌组织中FLT-1、FLK-1的表达与大肠癌临床病理参数之间的关系;以脂质体lip-2000为载体,用针对VEGF特异靶点的siRNA转染入3种不同分化人大肠癌细胞系Caco-2、HT29、HCT116后,免疫细胞化学S-P法、Western Blot检测VEGF蛋白表达变化,MTT法检测对细胞增殖的影响;流式细胞技术检测细胞凋亡。结果:(1)大肠癌组织VEGF和受体FLT-1、FLK-1阳性表达率显著高于正常大肠组织(P<0.05)。VEGF的表达在有无淋巴结转移组和不同的Duke’s分期中亦有显著差异(P<0.05)。FLT-1和FLK-1在大肠癌组织的阳性表达呈显著正相关,(r=0.457, P<0.05)。(2)VEGF-siRNA转染Caco-2、HT29、HCT116细胞后,免疫细胞化学结果显示:三种大肠癌细胞系的正常对照组,脂质体对照组及阴性错配对照组VEGF表达均呈深棕黄色强阳性表达,三组无明显差别;转染VEGF-siRNA组阳性细胞数均无明显减少,阳性细胞细胞浆呈浅棕黄色弱阳性表达。Western blot结果显示:Caco-2、HT29、HCT116细胞VEGF-siRNA组细胞的蛋白条带亮度均明显低于正常对照组、脂质体对照组和阴性错配对照组,三种细胞的VEGF-siRNA组VEGF蛋白表达均较对照组明显下降。(3)MTT检测结果:与阴性对照组相比,三种细胞的VEGF-siRNA组细胞生长出现明显的抑制(P<0.05)。同一种细胞系VEGF- siRNA组中,不同时段(24h、48h、72h)肿瘤细胞增殖抑制率之间有显著差异(P<0.05),且随着作用时间的增加,抑制率呈上升趋势,表明细胞生长抑制率在一定剂量范围内随时间的增加而增加,具有时间依赖性。同一时间阶段不同细胞(Caco-2、HT29、HCT116)的VEGF -siRNA组的抑制率之间差异有统计学意义(P<0.05)。(4)流式细胞术检测结果表明:与正常对照和阴性对照细胞组相比, Caco-2、HT29、HCT116细胞的VEGF-siRNA组,均出现明显亚二倍体峰,三种大肠癌细胞系VEGF-siRNA组的凋亡率显著高于正常对照组,两者比较差异有显著性(P<0.01)。结论:VEGF和受体FLT-1、FLK-1与大肠癌的发生密切相关,VEGF与大肠癌的预后有关。siRNA干扰VEGF基因能有效抑制人大肠癌细胞系VEGF蛋白表达,细胞增殖能力减弱,促进细胞凋亡。以VEGF基因为靶点,利用siRNA技术进行基因治疗有可能成为一种新的有效手段。