背景与目的:　　糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病最重要的微血管并发症之一，是导致我国终末期肾病(ESRD)的第二位原因。DN的发病机制复杂，目前尚缺乏特效的预防和治疗手段。深入阐明其发病机制，开发疗效确切的药物是当下亟待解决的问题。半乳糖凝集素-3（Galectin-3）是半乳糖凝集素家族的重要成员之一，参与了细胞黏附、细胞凋亡、炎症反应、组织纤维化及肿瘤转移等多种生理病理过程。作为晚期糖基化终末产物(AGEs)的受体之一，Galectin-3与DN关系密切，其在DN发病中的作用日益受到关注。越来越多的研究表明中药单体对DN具有确切的治疗效果，黄芪甲苷(AstragalosideⅣ，AS-Ⅳ)是黄芪主要活性成分之一，近年来其对肾脏的保护作用日益受到重视。本研究通过检测2型糖尿病(T2DM)及DN不同分期患者Galectin-3外周血水平，分析其与DN不同分期及中医证型的相关性，探讨Galectin-3对DN患者肾脏损伤的预测价值及其与不同中医证型的关系。在临床研究的基础上，进一步通过动物实验研究Galectin-3在DN损伤中的作用机制，并给予AS-Ⅳ进行干预，观察AS-Ⅳ能否通过调节Galectin-3的表达来减轻DN的肾损伤，从而为中医药防治DN提供更好的手段。　　研究方法:　　本课题分为临床研究及实验研究两部分。　　1.临床研究:选取2015年8月至2016年4月深圳市中医院住院的T2DM患者30例、DN患者120例及体检科健康人30例为研究对象。根据Morgensen分期，将120例DN患者分为DN（1-2）期30例、DN3期30例、DN4期30例、DN5期30例。收集所有患者的性别、年龄等基本资料，填写中医症候积分表，由两名副主任中医师进行中医辨证分型。隔夜12小时采集空腹静脉血，用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清Galectin-3水平，相关生化指标送深圳市中医院检验科检测。　　2.动物试验:实验选用5-6周龄雄性C57BL/6小鼠30只，腹腔注射链脲佐菌素溶液(streptozotocin，STZ)造成1型糖尿病(T1DM)小鼠模型，随机分为正常对照组、糖尿病模型组及黄芪甲苷组。每周监测各组小鼠的空腹血糖及体重;治疗的第4周和第8周留取24小时尿液;干预8周后收集血、尿及肾脏标本，检测各组小鼠的肝肾功能等生化指标;用ELISA检测小鼠24小时尿蛋白、血胰岛素水平及肾小管损伤相关指标;用过碘酸雪夫氏染色法(PAS)检测各组小鼠肾小球的大小、肾小球系膜基质的沉积水平;用透射电镜检测肾小球与肾小管超微病理损伤;用免疫印迹法(Westernblotting，WB)检测肾脏皮质MEK1/2-ERK1/2-RSK2信号通路相关蛋白及Galectin-3的表达水平;用免疫组织化学法检测小鼠肾脏Galectin-3及ERK1/2的表达位置。　　研究结果:　　1.临床研究结果:各组病例的性别、体重、BMI等基础资料及用药情况无明显差异，但年龄及病程存在显著性差异。随着DN病情的加重，Galectin-3呈逐渐升高趋势，各组间比较差异有统计学意义。Spearman相关性分析显示Galectin-3与DN患者的年龄、血肌酐、β2微球蛋白、尿微量白蛋白肌酐比值及收缩压呈正相关，与空腹血糖、糖化血红蛋白、肾小球率过滤呈负相关。多元逐步回归分析显示Galectin-3与DN患者肾小球率过滤呈显著负相关。DN早期中医本证以阴虚燥热证为主，随着病情进展，脾肾气虚证逐渐增多;DN早期中医标证以湿热证为主，随着病情进展，寒湿证及痰证逐渐增多，瘀证则贯穿该病的始终。Galectin-3与DN中医证型的本证存在相关性，随阴虚燥热-气阴两虚-脾肾气虚-阴阳两虚的病机变化，其血清水平逐渐增高。　　2.实验研究结果:与正常组比较，模型组空腹血糖、糖化血红蛋白、尿糖、心率及肾重体重比值均显著升高，差异有统计学意义;体重、血胰岛素、收缩压、舒张压及平均动脉压显著下降，差异有统计学意义;与模型组比较，治疗组糖化血红蛋白及心率明显降低，收缩压、舒张压、平均动脉压明显升高，差异有统计学意义，而体重、血糖、尿糖、血胰岛素及肾重体重比值无显著差异。与正常组比较，模型组第4周及第8周24小时尿蛋白明显升高，差异有统计学意义;经AS-Ⅳ治疗后，24小时尿蛋白显著下降，与模型组比较差异有统计学意义。模型组尿NGAL、NAG及TGF-β1较正常组显著升高，经AS-Ⅳ治疗后，NAG和NGAL明显下降，TGF-β1下降不明显。在生化指标方面，与正常组比较，模型组ALT、AST、ALB、TP、TG、BUN及Scr均显著升高;与模型组比较，治疗组Scr显著下降，TC及HDL-C显著升高，但其余生化指标变化不明显。病理方面，模型组肾小球系膜基质沉积水平、裂隙面宽度、肾小球基底膜厚度及肾小管基底膜厚度均较正常组显著增加，经AS-Ⅳ治疗后肾小球系膜基质沉积水平、肾小球基底膜厚度及裂隙面宽度明显的下降。与正常组比较，模型组肾脏Galectin-3、P-MEK1/2、P-ERK1/2、P-RSK2蛋白表达水平明显升高，经AS-Ⅳ治疗后，上述蛋白在肾脏内的表达水平显著下降。　　研究结论:　　1.Galectin-3与DN肾损害密切相关，可能成为诊断早期DN及预测其病情进展的可靠生物标志物;　　2.Galectin-3可以反映DN中医证型的动态变化，与中医证型的本证之间存在一定的相关性，可以考虑将Galectin-3作为DN中医辨证分型的客观指标之一;　　3.STZ诱导的糖尿病小鼠肾脏Galectin-3表达明显增加，MEK1/2-ERK1/2-RSK2信号通路活化;　　4.AS-Ⅳ对STZ诱导的糖尿病肾损伤有保护作用，其作用机制可能与下调Galectin-3表达水平，从而抑制MEK1/2-ERK1/2-RSK2信号转导通路的过度活化有关。