抗DR5三聚纳米抗体的制备及其对小鼠结直肠肿瘤细胞的作用效果

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随着生命科学的发展,促使癌细胞凋亡的诱导剂研究逐渐成为人们关注的热点。在人类大部分癌症组织中检测到DR5大量表达,而在正常组织中几乎不表达,通过DR5来研究和制备细胞凋亡诱导剂具有重要的科学意义和应用价值。本研究选取死亡受体DR5作为靶蛋白,利用羊驼免疫制备对应的重链抗体,用特异性引物克隆其可变区序列(VHH),通过噬菌体展示技术筛选得到高亲和力的纳米抗体。构建载体并进行改造,使其在大肠杆菌中表达。将纯化后的纳米抗体进行去内毒素处理,研究其对不同细胞的毒性作用,同时对通过AOM/DSS法诱导的结直肠癌小鼠进行体内靶向效果实验。本试验通过重组纳米抗体三聚体,探索其在诱导癌细胞凋亡方面的作用,并且检测其对正常细胞的影响,旨在为治疗癌症以及新药物的研发开辟新的思路并提供科学的理论支持。主要的试验结果总结如下:(1)ELISA检测结果显示OD450大于1.5,成功筛选得到高亲和力纳米抗体。(2)成功制备了抗DR5纳米抗体三聚体,且ITC结果显示解离常数(Kd)小于10 n M,说明重组的纳米抗体三聚体与抗原DR5亲和力高。(3)重组抗DR5纳米抗体对肺癌(A549)肝癌(Hep G2)乳腺癌(MDA-MB-231)细胞株均具有细胞毒杀伤作用,对正常的血管内皮细胞(HUVEC)几乎没有影响。(4)通过AOM/DSS法成功诱导了小鼠结直肠癌模型,模型成功率为100%。(5)抗DR5纳米抗体三聚体可以对结直肠癌小鼠起到良好的治疗作用,给药一个月后,小鼠结直肠肿瘤的数量和大小均显著下降,且随着给药浓度增加治疗效果越明显。
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