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由于蛋鸡的饲养周期长,产蛋需求量大,蛋鸡出现骨质疏松的风险较高,而骨质疏松症易出现蛋鸡的产蛋量下降,蛋壳质量降低,骨折,瘫痪,甚至死亡,严重影响蛋鸡的经济效益及动物福利。益生菌是一种新型无毒、无残留、无污染的绿色安全微生态制剂,能维护宿主肠道健康,提高机体免疫力和生长生产性能,是一类有效的抗生素替代品。最新研究显示,益生菌还可影响人和动物的骨代谢,增加腿骨密度和矿物质含量,阻止骨量减少。因此本文旨在研究枯草芽孢杆菌对蛋鸡生产性能和骨性能的影响并探究其可能作用机制,给枯草芽孢杆菌在实际应用的推广上提供科学依据。本研究选取24只48周龄的蛋鸡,随机分成对照组（Cont,饲喂基础饲料）,枯草芽孢杆菌组（B0.5,在基础饲料中添加0.5 g/kg的枯草芽孢杆菌）,每组12只,持续饲养60 d,自由饮水饮食。为分析枯草芽孢杆菌对蛋鸡生产性能的影响,日常记录产蛋率和软破壳蛋率,每10 d,从各组收集12个鸡蛋,使用蛋品质分析仪、蛋壳强度测定仪和蛋壳厚度计检测蛋重、哈氏单位、蛋白高度、蛋黄颜色、蛋壳强度和厚度。在第30和60 d,收集新鲜粪便,检测粪便中枯草芽孢杆菌菌落数,验证枯草芽孢杆菌定植与否。为验证枯草芽孢杆菌对蛋鸡骨代谢的影响,并探讨它的作用机制,在第30 d和第61d采血后,利用ELISA和生化仪检测了血液因子1,25-（OH）2D3、PTH、CT、E、IL-1、IL-6、TNF-α、LPS、D-LA、Ca、P、ALP、AST和TRACP水平。其次,第61 d实验结束后解剖所有的生存鸡采集蛋鸡股骨和胫骨、各肠段及其肠内容物,利用万能试验机和骨密度测定仪检测骨强度和骨密度,HE染色观察胫骨和各肠段组织形态学变化,使用电感耦合等离子体发射光谱仪检测了股骨、蛋壳和粪便内Ca、P和Mg元素的含量。同时,利用荧光定量检测了股骨骨代谢相关基因OPG、SOST、COL1A2、RANK、RANKL的表达量。通过各肠段的紧密连接蛋白OCLN和JAM-A mRNA的表达水平的检测及各肠段的pH值,确定了枯草芽孢杆菌主要影响的肠段。之后选取十二指肠进行转录组测序分析,验证了免疫相关差异目的基因TF、CYBB、P2RX7、PRKCB mRNA以及炎症基因IL-1、IL-6和TNF-αmRNA的表达情况。同时,还进行了十二指肠中氧化应激指标SOD、MDA和GSH-Px含量检测和利用16s r RNA对蛋鸡盲肠菌群多样性分析。实验一:结果显示B0.5组蛋鸡的软破壳蛋率（P<0.05）,蛋壳厚度（P<0.05）分别被显著降低和提高,同时股骨最大载荷（P=0.06）,最大应力（P<0.01）,刚度（P<0.01）和杨氏模量（P<0.01）也显著增加,而骨应变（P=0.06）明显减小。与对照组相比,在第61 d,B0.5组的血清P（P<0.01）含量显著性降低,但股骨中P（P<0.05）含量显著性增加。股骨中Mg含量减少（P=0.04）,并被大量排出。另外,B0.5组的血浆中雌二醇（P<0.01）含量显著提高,炎症因子IL-1、TNF-α（P<0.01）的含量降低,并股骨中OPG mRNA的表达量增加。实验二:结果显示B0.5组的十二指肠、回肠和盲肠的pH值与对照组相比没有变化,但空肠的pH水平显著高于对照组（P<0.01）。与对照组相比,B0.5组蛋鸡十二指肠紧密连接蛋白OCLN mRNA（P<0.05）的相对表达量显著增高,但其他肠段没有。根据PCR结果选取十二指肠进行转录组分析,获得了上调基因397条和下调基因501条共898条基因。这些基因主要富集在炎症、免疫相关GO功能上,基因CYBB（P<0.01）、TF（P<0.05）、P2RX7（P=0.066）、PRKCB（P=0.091）、TNF-α（P<0.01）相对表达量的变化与转录组分析结果一致。饲喂枯草芽孢杆菌显著降低十二指肠内MDA（P<0.05）含量,但不改变SOD和GSH-Px酶活性。16s RNA分析结果显示,枯草芽孢杆菌显著性在门水平上减少蓝藻菌门（P=0.02）和梭杆菌门（P=0.10）的相对丰度。在属水平上降低Eubacterium＿hallii＿group（P=0.04）、Mailhella（P=0.04）、norank＿f＿＿nor-ank＿o＿＿Saccharimonadales（P=0.02）、Lachnospiraceae＿FCS020＿group（P=0.03）、norank＿f＿＿norank＿o＿＿Gastranaerophilales（P=0.04）、Oxalobacter（P=0.03）、Hy-drogenoanaerobacterium（P=0.05）、Ruminiclostridium（P=0.04）和Lachnospirace-ae＿UCG-010（P<0.05）,Ruminococcus＿torques＿group（P=0.06）,CHKCI001（P=0.07）、Fusobacterium（P=0.10）、Bilophila（P=0.08）的相对丰度并增加Weissella（P=0.08）的相对丰度。以上结果表明,枯草芽孢杆菌可减少有害促炎菌的含量调节肠道微生物屏障,并可抑制十二指肠氧化损伤和炎症反应,提高紧密连接蛋白OCLN的表达,维护肠道的免疫屏障和物理屏障。这有利于降低全身炎症反应,提高雌二醇分泌量,改变钙磷代谢,从而保护骨质量,增强骨强度,改善蛋壳质量。