论文部分内容阅读
猪链球菌Streptococcus suis, SS)属于革兰氏阳性菌,是危害养猪行业的一个重要传染性病原菌。近年来,此病在我国造成的危害日益加大,不仅给养殖业造成重大损失,同时给公共卫生安全带来了严重威胁。目前,对于SS的预防与治疗主要是采用抗生素疗法,但由于长期滥用抗生素,导致耐药菌株出现的比例越来越大,同时对于该病的有效防控形势也越来越严峻。而要全面控制该病,前提需要对SS分离菌做出准确的鉴定。本试验以SS2、SS7、SS9为研究对象,应用噬菌体展示技术对其表面分子结合多肽(Surface molecule binding peptide, SMBP)进行研究,为SS分型鉴定新方法的研究提供平台,同时为开发防治SS病的新型药物提供理论基础。主要试验如下:试验一通过噬菌体展示技术对SS2、SS7口SS9三者共同的SMBP或两者(SS2和SS7、SS2和SS9、SS7和SS9)共同的SMBP进行筛选,经过两轮特异性的筛选后,共挑取144个噬菌体克隆进行ELISA方法验证,结果得到对应3种类型的共同SMBP的5个阳性噬菌体克隆,其中SS2与SS7共同SMBP和SS2与SS9共同SMBP各筛到1个阳性噬菌体克隆;三者共同的SMBP筛选到3个;而SS7与SS9共同的SMBP暂时没有筛到阳性噬菌体克隆。经BLAST分析后,发现筛选到的SMBP与宿主细胞受体蛋白、宿主细胞分泌的酶类物质、宿主细胞表面的调控因子等这类蛋白有同源性。表明筛选到的SMBP除了可以为SS鉴定的新方法研究奠定基础外,也可为细菌感染宿主细胞、细菌对宿主的致病机理、细菌抗宿主免疫应答的逃避机制等方面提供研究平台。试验二通过噬菌体展示技术筛选到的关于SS2、SS7及SS9特异的SMBP,可以用于SS新的分型方法的研究。试验利用“差减法”并结合“包被-离心-包被”筛选形式进行三轮特异性筛选,共筛到5个阳性噬菌体克隆,其中以SS2为靶分子筛选到2个阳性噬菌体克隆,测序后得到一个独立多肽,即VHFAPSPLTMLG;而SS9特异的SMBP共得到3个不同的多肽,同源性比对发现它们之间有较高的同源性;之后对这5个阳性噬菌体克隆进行特异性验证,结果显示其特异性都较强。但试验暂时没有筛到SS7特异的SMBP阳性噬菌体克隆。试验三通过对抑制SS2生长的多肽进行筛选,目的是为开发防治猪链球菌病的新型药物提供理论基础。试验挑取的398个噬菌体中,共得到7个对SS2有抑制作用的噬菌体克隆,测序后得到4个独立序列,对所得的序列在NCBI网页上进行BLAST比对,发现筛选到的多肽与一些有抑菌或杀菌作用的蛋白有同源性匹配位点,如青霉素结合蛋白、溶菌酶、糖基转移酶、细胞分裂Ftsk蛋白、组氨酸激酶等。这些信息均可为进一步研究试验结果提供帮助。