加味半夏曲的发酵工艺,优势菌种分离与鉴定及纯种发酵研究

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目的:随着猪集约化养殖的发展,养殖密度增加的同时,饲料中能量、蛋白水平普遍过高。在这种背景下,猪容易发生咳嗽、喘气、便秘、腹泻、拉“饲料便”等现象。中兽医理论认为“肺与大肠互为表里”,大肠的便秘必定会引起肺部的损伤而喘气,肺部喘气导致血液中含氧量不足,引起大肠的推力不够而便秘。故临床上研究开发“肺肠同治”的药物意义重大。加味半夏曲是在半夏曲基础上加入陈皮、茯苓、甘草经固态发酵而成的一类中药曲剂,半夏曲既可温中止呕促食欲,又可化痰降气止咳喘,在方中做主药;陈皮理气和中,气顺则痰消咳止,在方中做辅药;茯苓健脾渗湿,湿去则痰无生源,在方中做佐药;甘草调和诸药,在方中做使药。加味半夏曲在一定程度上可增强半夏曲的止咳化痰,消食化积的功效。本文旨在研究加味半夏曲的发酵工艺及筛选纯种发酵加味半夏曲产酶活性最高的菌株。方法:1)加味半夏曲发酵工艺的预研究。2)在预研究基础上选取加水比例,温度,发酵时间为考察因素,以蛋白酶和淀粉酶活力为指标,通过双指标正交设计法探究加味半夏曲的发酵工艺。3)通过传统菌种分离培养法从六神曲(自制)、六神曲(同仁堂)、加味半夏曲中分离并纯化优势菌株,普通PCR鉴定纯种发酵加味半夏曲中产酶活性最高的菌株。结果:1)通过比较三批不同产地的六神曲,研究发现六神曲(同仁堂)发酵加味半夏曲的效果最好;预研究考察9批加味半夏曲发现,发酵温度控制在28℃或32℃,发酵时间72h,加味半夏曲的蛋白酶活力相对较高,为67.17U/g或61.2U/g。2)双指标正交设计法得到加味半夏曲的发酵工艺,即加水比例1:0.5,发酵温度28℃,发酵时间72h。重复性试验表明该工艺稳定可行。3)从加味半夏曲中分离得到3株,六神曲(自制)中分离得到3株,六神曲(同仁堂)中分离得到6株,共分离得到12株优势菌株,纯种发酵加味半夏曲并筛选产蛋白酶和淀粉酶活性最高的菌株,形态学观察和普通PCR鉴定该菌为曲霉属黑曲霉。结论:加味半夏曲的发酵工艺定为加水比例1:0.5,发酵温度28℃,发酵时间72h,工艺参数的优化为加味半夏曲的规范化生产提供理论依据;纯种发酵加味半夏曲中产酶活性最高的是黑曲霉,纯种发酵的成功为今后定向提高加味半夏曲的内在质量奠定基础。
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