大鼠发育期根端复合体的组织学研究

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目的:  本实验旨在通过对正常发育情况下SD大鼠牙根的组织学形态结构进行观察,了解 SD大鼠牙根发育过程的各个阶段发育期根端复合体的组织学状态,确定 SD大鼠牙根发育过程的组织学时序性,探究发育期根端复合体与牙根发育过程的各阶段组织学变化之间的关系。  方法:  不同性别的SD大鼠都将被使用,我们将出生当天设计为“0”天。分别选取出生后3、5、7、9、11、13、17、21、25天的SD大鼠,用颈部脱臼的方式处死 SD大鼠,75%乙醇浸泡5min,将 SD大鼠固定于超净工作台上。用眼科剪沿 SD大鼠口角处切断上下颌骨,完整分离SD大鼠下颌骨,去除舌体及周围多余组织。  一、HE染色:  将下颌骨组织放置于4%的多聚甲醛中固定过夜,10%的EDTA-2Na脱钙2周,梯级乙醇脱水,二甲苯透明石蜡包埋,沿下颌第一磨牙近远中方向做连续5μm切片,切片行 HE染色,光学显微镜下观察其组织学结构。  二、免疫组织化学染色  切片常规脱蜡至水,缓冲液洗3min/2次。将切片放于Hydrogen Peroxide Block中孵育10-15分钟,PBS缓冲液洗5min/2次,滴加Ultra v block,室温下孵育5min,缓冲液冲洗5min/2次,滴加兔抗鼠CK14抗体37℃孵育2小时,缓冲液洗5min/2次,滴加增强子,室温下孵育20分钟,缓冲液洗5min/2次,向1ml DAB Plus Substrate中滴加1-2滴DAB Plus Chromogen,混匀后滴加到切片上,孵育15分钟,自来水反复沖洗,复染,脱水,透明,封片。兔抗鼠CK14抗体由Abclonal公司提供。  结果:  出生后3d,SD大鼠下颌第一磨牙牙冠尚未完全形成,冠边缘处尚无硬组织形成,成釉器在牙颈部缩窄,尚未观察到HERS结构形成。出生后5d,牙冠继续发育,颈部缩窄,尚未观察到明显的HERS结构出现。出生后7d,牙冠形态已经基本形成,牙颈部缩窄,内釉上皮细胞和外釉上皮细胞在牙颈部增值,此时可以观察到明显的赫特维希上皮根鞘(HERS)结构形成,HERS向内弯曲,并向根尖方向延长,HERS结构将牙囊和牙乳头这两种间充质组织分隔开来。出生后9d,牙冠形态已经完全形成,冠部牙釉质及牙本质厚度持续增加,免疫组织化学染色提示 HERS继续向未来根尖孔方向延伸,HERS保持完整性,牙冠边缘尚未见根部牙本质及牙骨质形成。出生后11d,在牙冠边缘可以看到根部牙本质形成,HERS依然保持它的基本长度及完整性,但根部牙本质表面尚未见明显牙骨质形成。出生后13天,HERS依然保持其基本长度,但部分 HERS已发生断裂,根部牙本质的表面可见少许牙骨质形成,根尖方向的细胞相对于冠部牙髓更为密集。出生后17天,HERS继续发生断裂,根部牙本质已经到达接近一半左右的牙根全长,并持续增厚,无细胞牙骨质形成于根部牙本质表面,根尖孔尚未闭合。出生后21d,牙齿初萌,根部牙本质持续增厚,牙根也继续延长,HERS已经发生断裂,仅有在根尖处保留部分完整HERS.出生后25d,牙冠已明显萌出,牙根继续延伸,根尖孔仍未完全封闭,成牙本质细胞呈柱状,根部牙本质表面可以观察到细胞牙骨质和无细胞牙骨质形成,HERS已完全断裂,根尖处细胞浓聚,反应根尖处细胞的高活性状态。  结论:  1.本实验系统性的对正常大鼠牙根发育状态下发育期根端复合体的组织形态学变化进行观察,明确了大鼠牙根发育的组织学时序特点,初步确定了发育期根端复合体与牙根发育的各阶段组织学变化之间的关系。  2.大鼠牙根的组织形态与人牙根组织形态在一定程度上具有相似性,同时在时间跨度更短,此实验所获得的大鼠牙根的组织形态动态发展模型,为将来研究牙根发育异常的发病机制提供前期基础。  3.大鼠牙根发育经历了HERS形成,延长,断裂一系列动态发展过程,在此发展过程中,牙囊、牙乳头以及HERS之间相互作用,最终形成正常的牙根形态结构。
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