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细胞环境复杂,但利用小分子荧光探针不仅实现了细胞水平的成像,还实现了亚细胞水平的成像,使研究人员对生物系统的研究进入到更深层次。随着应用环境的变化,对小分子荧光探针的要求也更高,需要不断被优化。在特定条件下具有荧光响应的小分子探针在更具有灵敏性和选择性的同时也降低了背景荧光。
细胞中进行着多种生物化学反应,生物正交的化学反应即使在细胞中也能够快递、选择性地以高产率进行。在这些生物正交反应中,光点击反应是以一定波长的光来触发二芳基四氮唑和烯烃之间环加成生成吡唑啉,反应速率快,利用光而不是具有较大细胞毒性的金属离子作为催化剂,同时反应物芳香四氮唑本身不具有荧光,反应之后生成具有荧光的吡唑啉,光照前后实现荧光信号“Turn-On”。基于此,本文进行的主要工作内容如下:
1、以芳香重氮盐和芳香磺酰腙为原料,设计合成出一系列二芳基四氮唑化合物la-lg,与具有末端双键的核苷类似物5一乙烯基一2’一脱氧尿苷(VdU)在365nm下进行分子间光点击反应,进行细胞核成像,以及能够发生分子内光点击反应的分别修饰有线粒体和溶酶体靶向基团的化合物TetⅠ和TetⅡ进行线粒体及溶酶体成像。
2、对化合物1a-1g、化合物TetⅠ和TetⅡ进行化学结构表征,光点击反应前后的光谱性质以及细胞毒性的相关研究。结果表明化合物1a-1g与VdU分子间光点击反应在水溶液中反应性差,而化合物TetⅠ和TetⅡ分子内光点击反应在水溶液中反应性较好,仅用低功率手持紫外灯激活在活细胞中的TetⅠ和TetⅡ的光点击反应,产生荧光产物,以较高的共定位系数实现线粒体和溶酶体的成像。
总之,确认了化合物1a-1g与VdU的分子间光点击反应,TetⅠ和TetⅡ分子内的光点击反应性。TetⅠ和TetⅡ用手持紫外灯即可点亮在活细胞中的荧光,对线粒体和溶酶体进行成像。
细胞中进行着多种生物化学反应,生物正交的化学反应即使在细胞中也能够快递、选择性地以高产率进行。在这些生物正交反应中,光点击反应是以一定波长的光来触发二芳基四氮唑和烯烃之间环加成生成吡唑啉,反应速率快,利用光而不是具有较大细胞毒性的金属离子作为催化剂,同时反应物芳香四氮唑本身不具有荧光,反应之后生成具有荧光的吡唑啉,光照前后实现荧光信号“Turn-On”。基于此,本文进行的主要工作内容如下:
1、以芳香重氮盐和芳香磺酰腙为原料,设计合成出一系列二芳基四氮唑化合物la-lg,与具有末端双键的核苷类似物5一乙烯基一2’一脱氧尿苷(VdU)在365nm下进行分子间光点击反应,进行细胞核成像,以及能够发生分子内光点击反应的分别修饰有线粒体和溶酶体靶向基团的化合物TetⅠ和TetⅡ进行线粒体及溶酶体成像。
2、对化合物1a-1g、化合物TetⅠ和TetⅡ进行化学结构表征,光点击反应前后的光谱性质以及细胞毒性的相关研究。结果表明化合物1a-1g与VdU分子间光点击反应在水溶液中反应性差,而化合物TetⅠ和TetⅡ分子内光点击反应在水溶液中反应性较好,仅用低功率手持紫外灯激活在活细胞中的TetⅠ和TetⅡ的光点击反应,产生荧光产物,以较高的共定位系数实现线粒体和溶酶体的成像。
总之,确认了化合物1a-1g与VdU的分子间光点击反应,TetⅠ和TetⅡ分子内的光点击反应性。TetⅠ和TetⅡ用手持紫外灯即可点亮在活细胞中的荧光,对线粒体和溶酶体进行成像。