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目的：呼吸道合胞病毒(RSV)是婴幼儿下呼吸道感染的最重要病原，主要引起肺炎和哮喘综合征等，严重感染者会发生呼吸衰竭。接种疫苗是重要的预防措施，世界卫生组织已将RSV疫苗定为最优先发展的疫苗之一。十九世纪六十年代福尔马林灭活的RSV疫苗(FI-RSV)被批准进行临床试验，接种对象是两个月至七岁的幼儿，当RSV流行时，与未接种者相比，接种者不仅没被保护，反而发生了更严重的肺部免疫病理反应，并造成两例死亡。这种疫苗增强性肺部免疫病理的发病机制目前尚不清楚，大量研究表明：固有免疫在疫苗增强性肺部免疫病理中发挥着重要作用。树突状细胞(DC)是重要的固有免疫细胞，而且是连接固有免疫和适应性免疫的重要桥梁。Notch信号是一种介导细胞与细胞间局部信号传递的机制，对细胞的命运起决定性作用。最近发现：在对病原和疫苗的应答过程中，Notch信号对DC和T细胞等外周免疫细胞的激活和分化方向起着关键的调节作用。RSV的天然宿主是人和灵长类，小鼠模型不能复制人类感染RSV的临床症状和炎症病理反应；而与RSV同病毒属的小鼠肺炎病毒(PVM)感染的小鼠与RSV感染的婴幼儿的症状及病理反应相一致；用PVM攻击福尔马林灭活的PVM(FI-PVM)免疫的小鼠，即FI-PVM/PVM/小鼠模型，最近已经被用于RSV疫苗增强性肺部免疫病理机制的研究。本课题用FI-PVM体外刺激小鼠DC，研究Notch配体、受体以及相关的细胞因子在DC中的表达，为研究疫苗增强的肺部免疫病理的作用机制奠定基础。 方法：培养小鼠骨髓来源DC、BHK-21细胞，传代培养PVM病毒，制备FI-PVM疫苗。合成佐剂CpG2216。用PVM、FI-PVM以及FI-PVM+CpG2216刺激小鼠DC，分别于2小时、6小时、18小时收集细胞，提取RNA，进行荧光定量PCR检测；收集刺激18小时的细胞，提取总蛋白，用Western-blot进行蛋白水平检测；用荧光抗体标记刺激后的DC，用流式细胞仪检测MHC-Ⅱ分子和共刺激分子的表达。 结果：⑴测定出病毒滴度，确定了病毒、疫苗、佐剂的使用量；⑵成功分化出小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC)；⑶实时定量PCR检测Notch、Notch配体、细胞因子IL-6、趋化因子RANTES的结果显示：与对照组相比，疫苗FI-PVM刺激的小鼠DC可于不同时间点高表达Notch配、受体及相关的细胞因子和趋化因子，特别是疫苗FI-PVM联合佐剂CpG2216刺激DC表达的Notch2-4、Delta4和Jagged1-2显著高于对照组和单独FI-PVM刺激的DC。趋化因子MCP-3的检测结果显示：单独FI-PVM刺激的DC分泌的MCP-3未见升高，但FI-PVM联合佐剂CpG2216刺激DC高表达MCP-3。⑷Western-blot结果显示：FI-PVM联合佐剂CpG2216刺激DC18小时后Notch1、Notch2、配体Delta4和靶基因HES-1的蛋白表达量高于对照组和其它各组。此结果与RT-PCR检测结果一致。⑸流式细胞仪检测结果显示：不同刺激因素处理组，在刺激18小时后细胞表面MHC-Ⅱ分子和CD80分子双阳性的表达，对照组为4.1％，PVM刺激组为6.7％，FI-PVM刺激组为6.9％，疫苗加佐剂CpG2216刺激组为7.7％，疫苗加佐剂LPS刺激组为20％。 结论：呼吸道病毒疫苗FI-PVM，特别是与佐剂CpG2216联合能够刺激小鼠DC高表达Notch、配体、靶基因以及一些细胞因子和趋化因子，提示在呼吸道病毒疫苗免疫机体后，可能通过影响DC等固有免疫细胞的Notch信号而影响疫苗的免疫效果。