水稻矮缩病毒编码的基因沉默抑制因子的筛选及验证

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自1998年发现植物病毒编码的基因沉默抑制因子后,已在多种动植物病毒中发现该类蛋白并研究了其中部分蛋白的作用方式,并发现有的基因组较大的病毒编码多个基因沉默抑制因子,这对深入了解高等生物基因沉默的机制、植物抗病及植物与病毒的共进化关系、功能基因组研究及其应用等都具有重要的意义。2005年,发现双链RNA病毒水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)S10编码的Pns10是一个基因沉默抑制因子。RDV基因组较大,由12个片断组成。我们想知道该病毒基因组除了Pns10是否还编码其它的基因沉默抑制因子,所以,我们利用渗透注射的方法在转绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)的烟草中单独瞬时表达GFP或将RDV的7个基因(S2、S6、S7、S8、S9、S11、S12)分别与GFP共表达,结果显示GFP单独注射和GFP分别与RDV S2、S6、S7、S8、S9、S12混合注射叶片在7天以后观察不到GFP的表达,即产生GFP的基因沉默。而在RDV S11基因与GFP共注射的叶片中,7天以后仍能观察到较强的GFP表达。用GFP特异探针对上述叶片注射区进行Northern杂交分析显示,GFP的表达与荧光观察结果相一致。表明在RDV S11编码蛋白Pns11存在的情况下,GFP的基因沉默过程受到了抑制,即Pns11是RDV除Pns10以外的又一个基因沉默抑制因子。
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