银杏内生真菌的分离及抑菌活性研究

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植物内生真菌能够产生结构新颖、功能特殊的天然活性物质,是开发新型生物源农药的宝贵资源,在农业中具有广泛的应用前景。本文从银杏树中分离筛选得到2株内生真菌,编号为T-4和T-7,对几种重要的植物病原菌具有抑制作用,对其进行了生物学特性测定和代谢产物抑菌活性研究。主要研究结果如下:1.采用组织分离法,从银杏的茎、叶片和根皮组织内分离得到26株内生真菌。通过对峙试验,测定了26株内生真菌对辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici),番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum),苹果腐烂病菌(Cytospora mandshurica),苹果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides),梨黑星病菌(Venturia pirina),小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)6种植物病原菌的拮抗作用。结果表明17株内生真菌对6种供试病原菌有不同程度的抑制作用。其中T-4和T-7菌株作用较明显,对6种病原菌抑菌率均达到50%以上,对苹果腐烂病菌均达到90%以上;T-7对辣椒疫霉病菌的抑制率也达到90%以上。T-4对番茄枯萎病菌抑制率则在85%。2.内生真菌T-4和T-7的分类鉴定结果显示二者同为镰孢属(Fusarium sp.),其中T-7经分子生物学鉴定为为腐皮镰孢菌(Fusarium solani)。生物学特性研究测定了不同温度、光照、酸碱度及碳源、氮源和培养基条件下两株菌的生长情况。试验结果表明两株菌生长的适宜温度范围在28℃-32℃;T-4和T-7菌株分别适合在pH值为7-9和6-10范围内生长;葡萄糖和麦芽糖是T-4菌株生长的最适碳源,乳糖是T-7的最适碳源;T-4菌株生长适用的氮源是胰蛋白胨,T-7为硝酸钠; PDA或PSA是T-4菌株生长的适宜培养基,牛肉膏培养基对于T-7更为适用;两者皆不受光照条件影响。3.采用抑制菌丝生长速率法测定了26株内生真菌代谢产物的抑菌作用。经摇瓶发酵得到的菌丝,用乙酸乙酯萃取,得到的粗提物在200mg/L浓度下对供试病原菌的抑制作用较弱。发酵液对6种供试病原菌抑菌活性测定发现,T-4和T-7菌株发酵液表现出对苹果腐烂病菌、苹果炭疽病菌、梨黑星病菌和小麦赤霉病菌和番茄枯萎病菌的抑制作用,对苹果腐烂病菌的抑制率分别达到90%和85%以上。二者对辣椒疫霉病菌都没有表现出抑制作用。检测T-4、T-7菌丝发酵液在辣椒幼苗上的抑菌作用,结果表明T-7发酵液对感染辣椒疫霉的幼苗有23.17%的保护作用和15.43%的治疗作用,表现出一定的防治效果。
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