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目的:黑色素瘤作为一种恶性的皮肤肿瘤,放化疗的效果差且具有不良预后的情况,因此新的治疗靶点的发现仍然是亟待解决的问题。本研究利用SiRNA文库筛选技术,在黑色素瘤细胞系A375细胞中进行筛选,发现敲低甲状腺激素受体相互作用因子4(Thyroid Hormone Receptor Interactor 4,TRIP4)能够影响黑色素瘤细胞的生长,而该基因在黑色素瘤中的功能及相关机制的研究尚不明确。因此,我们在确定该基因在黑色素瘤细胞及病人组织中的表达水平后,选择不同黑色素瘤细胞系,敲低或过表达TRIP4之后,探索TRIP4对黑色素瘤生长的调控机制及生物学功能;并在裸鼠体外成瘤模型中进一步验证TRIP4调控黑色素瘤生长的的相关机制,深入研究TRIP4调控黑色素瘤生长的的分子机制并明确TRIP4的临床意义。本论文拟在此基础上确立TRIP4作为黑色素瘤治疗新靶点提供理论和实验依据。方法:(1)以siRNA library screen为实验新技术,寻找影响黑色素瘤细胞中的潜在靶基因。(2)应用基因转染技术来过表达或敲低TRIP4,研究其对细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学功能,以及相关分子信号通路的变化。(3)应用免疫印迹、免疫组化等技术检测人肿瘤细胞和正常细胞以及组织芯片标本中TRIP4的表达水平,并结合细胞特性和临床资料分析TRIP4的肿瘤特异性表达和它们在预测临床预后上的价值。(4)应用Pull down方法及染色质免疫共沉淀(Ch IP)技术检测TRIP4与炎症因子COX-2/iNOS启动子区结合情况。(5)使用免疫共沉淀(Co-IP)技术检测TRIP4与p300的相互作用。(6)利用细胞活性实验检测TRIP4对BRAF抑制剂的影响。(7)建立黑色素瘤裸鼠动物模型,进一步验证TRIP4对肿瘤生长,对COX-2/iNOS表达以及药物敏感性的影响。结果:(1)在本实验中,我们通过siRNA library screen筛选鉴定出TRIP4基因,发现TRIP4在黑色素瘤细胞和组织中高表达。(2)敲低TRIP4能够抑制黑色素瘤细胞的生长。(3)通过体内和体外实验证明TRIP4靶向炎症因子调控黑色素瘤的生长。(4)TRIP4可以通过NF-κB通路调控黑色素瘤细胞中炎症因子COX-2和iNOS的表达。(5)TRIP4可直接与COX-2和iNOS的启动子区结合进一步调控二者的表达。(6)TRIP4可协同p300靶向炎症因子调控黑色素瘤细胞的生长进程。(7)体内和体外实验证明敲低TRIP4可增强BRAF抑制剂的抗黑色素瘤生长作用。(8)黑色素瘤病人组织中,TRIP4与COX-2和iNOS的表达成正相关,并与黑色素瘤病人的不良预后呈正相关。结论:TRIP4在黑色素瘤病人组织中具有高的表达水平,并与病人的不良预后呈正相关。进一步研究发现TRIP4能够协同p300靶向炎症因子调控黑色素瘤的生长进程,此外,我们还发现TRIP4能够影响黑色素瘤靶向药物的敏感性。综上所述,我们目前的研究结果为TRIP4作为一个潜在的预后标志物和治疗靶点提供了基础理论依据,而TRIP4和BRAF的双靶向作用为黑色素瘤治疗的临床策略提供了可能性。