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目的:通过在FG中引入不同浓度的抑肽酶和氨甲环酸,探索其对FG支架的降解速率及对软骨细胞的繁殖、表型的维持、基质的分泌产生的影响及影响大小。在FG支架的降解与软骨细胞的繁殖、表型的维持、基质的分泌之间找到一最佳平衡点,为组织工程方法过渡到临床做前期工作。方法:1.取3周龄新西兰幼兔的关节软骨制取软骨细胞,体外单层培养、扩增后种植于FG支架上,构建标准FG支架细胞复合物和不同浓度的抑肽酶(5000KIU/ml、10000KIU/ml、20000KIU/ml)及氨甲环酸(10mg/ml、20mg/ml、30mg/ml)的改良FG支架细胞复合物(实验分九组,浓度由低到高),进行体外三维立体培养、扩增。观察软骨细胞在FG支架上的形态变化,绘制细胞生长曲线,光镜和透射电镜下的组织形态学观察及Ⅱ型胶原免疫组化检测(S—P法),并测量不同时期FG支架细胞复合物质量和载体降解情况,对所得数据进行统计学处理。结果:1.标准组及实验1、2、4、5组镜下可见软骨细胞在空泡内分裂增殖,改良7、8组一周后可见部分细胞分裂,细胞呈梭型,类似树枝样生长,呈现反分化现象,实验9组体外培养9天细胞呈阿米巴样改变,细胞分裂相少。2.标准组及改良1、5组,透射电镜下可见基质的外分泌。3.标准组及实验1、2、4、5组一周及二周Ⅱ型胶原免疫组化检测可见空泡内软骨细胞周围均出现阳性棕色颗粒,软骨细胞在纤维蛋白胶支架中立体培养可分泌胞外基质。4.标准FG支架细胞复合物和不同浓度的抑肽酶和氨甲环酸的改良FG支架细胞复合物体外培养1周及2周时,其剩余质量之间比较P<0.001,细胞标准支架组和所有实验组支架降解速度有显著性差异。而实验1,9组之间,体外培养1周及2周后剩余质量之间比较P<0.05。实验1组与实验9组支架体外培养降解速度有显著性差异。改良FG支架细胞组在体外4周的培养过程中仅有少量崩解,标准FG支架细胞组则完全崩解。5.标准组及改良1、5组细胞倍增平均时间4.7天,改良9组为5.9天。标准组及改良1、5组三条细胞生长曲线相近,而改良9组细胞生长曲线明显偏低。结论:1.通过在纤维蛋白胶中引入不同浓度的抑肽酶和氨甲环酸,在体外环境下均可以显著地减缓纤维蛋白胶的降解速度,浓度的高低与FG支架的降解速率成反比。2.不同浓度的抑肤酶和氨甲环酸对软骨细胞的增殖有一定的影响。高浓度抑肤酶和氨甲环酸的加入明显抑制了细胞的增殖。而浓度低于10000KJU/m1的抑肤酶和20mg/ml氨甲环酸的加入对细胞增殖无不良影响3.高浓度的抑肤酶(20O00KIU/ml)影响了细胞表型的维持,使软骨细胞呈现了去分化改变。4.抑肤酶浓度为l000oKlu/ml,氨甲环酸浓度为20mg/ml时,最大限度地延缓了FG支架的降解速度,而对软骨细胞的增殖、表型的维持、基质的分泌无不良影响,为最佳平衡点。