目的：STAT6是一个转录因子，主要由细胞因子IL-4、IL-13激活并导致Th2细胞分化，而Th2细胞在哮喘等变应性疾病的病因和发病机理中发挥重要作用。本研究通过建立小鼠变态反应气道炎症动物模型，观察STAT6在变态反应气道炎症中的表达以及DNA疫苗对STAT6的影响，探讨DNA疫苗对小鼠变态反应性气道炎症的治疗作用及作用机制；通过用重症哮喘患者血清诱导正常人气道上皮细胞株(16HBE)，观察上皮细胞STAT6的表达变化以及地塞米松对其干预作用，初步探讨重症哮喘患者血清对气道上皮细胞STAT6的影响。 方法：本研究分二个部分进行： 第一部分： 1．pcDNA-Der p2表达质粒的提取：屋尘螨Der p2变应原DNA疫苗(pcDNA-Der p2)的构建已完成。用去内毒素质粒提取试剂(MAXIPREP GFⅡTM Endo-Free Kit)大量提取质粒，其操作步骤按说明书进行。 2．小鼠的分组与免疫：32只BALB/c小鼠随机分为四组，每组8只。分别为正常对照组(A组)、pcDNA3.1对照组(B组)、DNA疫苗组(C组)和哮喘组(D组)。B组、C组和D组首先用10μg rDer p2和10μg尘螨提取物+4mg硫酸盐铝钾致敏小鼠，然后在第8、9天鼻内滴注rDer p2建立变应原诱导的变态反应气道炎症小鼠模型，在第10天和第25天分别予pcDNA3.1质粒、pcDNA-Der p2、或PBS接种，在第39天再次鼻内滴注rDer p2进行激发。正常对照组只使用PBS液。 3．支气管肺泡灌洗，进行细胞分类、计数及细胞因子测定：通过支气管肺泡灌洗观察小鼠气道炎症细胞的浸润情况。暴露小鼠气管并插入套管，用1000μl冰冷的磷酸盐缓冲液(PBS)逐渐滴入到肺内，反复抽吸2次，回收支气管肺泡灌洗液(BALF)>800μl，测定BALF中细胞总数及分类。用ELISA法测定BALF中IL-4、IL-13的水平。 4．组织学检查：在末次激发后24小时，离体肺组织，用10％中性甲醛固定，石蜡包埋，常规切片。观察肺组织的大体形态，使用HE染色法观察细胞浸润情况；利用过碘雪天酸(PAS)染色检测杯状细胞分泌粘液情况。对肺部炎症改变的组织病理学进行评分。 5．肺组织STAT6和NF-κB的免疫组织化学染色：其操作步骤按说明书进行 6．血清中Der p2特异性抗体水平的测定：末次激发后24小时，四组小鼠分别取血0.8ml。采用ELISA法测定Der p2特异性IgE水平。 第二部分： 1．用MTT比色法测定重症哮喘患者血清对16HBE增殖的影响，以及地塞米松对细胞增殖的抑制作用。 2．将16HBE随机分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)和地塞米松干预组(C组)，分别用健康人血清、重症哮喘患者血清、重症哮喘患者血清+地塞米松刺激，免疫荧光法测定上皮细胞STAT6表达改变。 3．统计学分析：采用SPSS11.5统计软件包统计学处理，各组数据用x±s表示，进行t检验、方差分析，P<0.05为有显著性差异。 结果： 1．组织学分析发现：变应原致敏的小鼠气道炎症非常显著，屋尘螨变应原DNA疫苗接种可抑制气道炎症反应。注射pcDNA3.1质粒对变应原诱导的气道炎症无抑制作用。组织病理学评分分析，DNA疫苗接种组较pcDNA3.1对照组、哮喘组，血管和支气管周围的细胞浸润程度明显减少，(P<0.01)；哮喘组和质粒对照组可见炎性细胞广泛浸润，杯状细胞增生、粘蛋白产生，而DNA疫苗组，气道炎症范围和细胞浸润程度均明显减少，杯状细胞增生减少、粘蛋白产生减少。 2．BALF中嗜酸性粒细胞的浸润和细胞因子表达水平：通过形态测定分析，Der p2免疫小鼠BALF中嗜酸性粒细胞(EOS)数量增多，DNA疫苗接种组较哮喘组减少(P<0.01)，而pcDNA3.1质粒对EOS的渗出几乎无作用。Der p2免疫小鼠BALF中IL-4、IL-13的水平增高，DNA疫苗接种组较哮喘组BALF中IL-4、IL-13的水平降低(P<0.01)，而pcDNA3.1质粒对IL-4、IL-13的产生几乎无作用。 3．STAT6和NF-κB在肺组织中的表达：Der p2免疫小鼠肺组织STAT6和NF-κB的表达增多，DNA疫苗接种可以减少STAT6和NF-κB的表达。pcDNA3.1质粒对STAT6和NF-κB的表达几乎无作用。 4．DNA疫苗可抑制IgE合成：末次变应原激发后，Der p2免疫小鼠的Det p2特异性IgE水平提高。与哮喘组相比，DNA疫苗组Der p2特异性IgE水平降低，而pcDNA3.1质粒对IgE的产生几乎无作用。 5.20％浓度的重症哮喘患者血清能明显诱导16HBE细胞株增殖(平均A值为0.543±0.112)，与对照组(平均A值为0.203±0.032)相比较差异明显(P<0.01)，地塞米松并不能抑制其增殖。 6．B组气道上皮细胞STAT6表达水平明显高于A组，而C组与B组相比较无明显差异。 结论： 1．屋尘螨Der p2变应原免疫小鼠肺组织STAT6表达增多，DNA疫苗免疫治疗可以减少STAT6的表达。 2．编码变应原的DNA疫苗可抑制变应原特异性IgE的形成，抑制肺组织中IL-4、IL-13的生成和NF-κB的表达，而抑制变应原诱导的气道炎症，故编码屋尘螨主要变应原Der p2的DNA疫苗能有效抑制变应原诱导的小鼠变应性气道炎症。 3．重症哮喘患者血清诱导人气道上皮细胞株(16HBE)后，上皮细胞STAT6表达水平增强，地塞米松不能抑制重症哮喘血清诱导的气道上皮细胞STAT6的表达。