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1研究目的:采用自主研发的果蝇运动训练装置和低氧装置对果蝇进行规律运动干预、间歇性低氧干预以及间歇性低氧联合规律运动干预,通过检测干预计划完成后果蝇dSir2表达量、心脏功能指标。研究不同的训练方式与dSir2表达量和心脏功能之间的关系,以探讨dSir2是否参与并调节心脏功能。因此实验分为:(1)间歇性低氧训练、规律运动以及间歇性低氧联合规律运动训练与dSir2突变表达对果蝇心脏功能的影响;(2)间歇性低氧训练、规律运动以及间歇性低氧联合规律运动训练与dSir2拯救表达对果蝇心脏功能的影响。2研究方法2.1果蝇的杂交与分组2.1.1dSir2正常表达和突变表达品系构建及分组雌性野生型W1118处女蝇与雄性Arm-Gal4,雌性Sirt15.26cn1处女蝇与雄性Sirt14.5cn1/SM6b,P{eve-laz}SB1杂交,收集4-6小时内羽化的处女蝇,并分别随机分为NC-dSir2组、NE-dSir2组、HC-dSir2组、HE-dSir2组、MC-dSir2组、ME-dSir2组、MHC-d Sir2组、MHE-dSir2组,每组400只。果蝇自第2天龄至第14天龄进行每周5天连续,每周休息两天的运动训练(9:30~12:00/天)或与低氧训练(14:00~20:00/天),所有果蝇在训练方案结束后的24h取材。2.1.2dSir2拯救表达表达杂交及分组雌性Sirt15.26cn1处女蝇与雄性Sirt14.5cn1/SM6b,P{eve-lacZ8.0}SB1杂交,收集4-6小时内羽化的处女蝇,并随机分为MC-dSir2组、ME-dSir2组、MHC-dSir2组、MHE-dSir2组、SC-dSir2组、SE-dSir2组、SHC-dSir2组、SHE-dSir2组,每组400只。果蝇自第2天龄至第14天龄进行每周连续5天,每周休息两天运动训练(9:30~12:00/天)或与低氧训练(14:00~20:00/天),所有果蝇在训练方案结束后的24h取材。2.2指标检测每组随机选10只果蝇检测dSir2 mRNA表达量,30-40只果蝇进行M-mode心脏功能检测,100只果蝇做运动能力检测。3研究结果3.1 q RT-pcr检测结果3.1.1生命早期间歇性低氧联合规律运动与dSir2突变表达对dSir2表达量的影响与NC-dSir2组相比,MC-dSir2组的dSir2 mRNA表达量更低,下调率为90.20%,这些结果显示dSir2突变体系构建成功。与NC-dSir2组相比,HC-dSir2组的dSir2 mRNA表达量更高,上调率为50.05%;与MC-dSir2组相比,MHC-dSir2组的dSir2 mRNA表达量更高,上调率为80.00%。这些结果表明间歇性低氧训练可能促进dSir2 mRNA表达。与NC-dSir2组相比,NE-dSir2组的dSir2 mRNA表达量更高,上调率为95.10%;与MC-dSir2组相比,ME-dSir2组的dSir2 mRNA表达量更高,上调率为80.00%。这些结果表明规律运动训练可能促进dSir2 mRNA表达。与NC-dSir2组相比,HE-dSir2组的dSir2 mRNA表达量更高,上调率为103%;与MC-dSir2组相比,MHE-dSir2组的dSir2 mRNA表达量更高,上调率为90.00%。这些结果表明间歇性低氧联合规律运动训练可能更显著促进dSir2 mRNA表达。3.1.2生命早期间歇性低氧联合规律运动与dSir2拯救表达对dSir2表达量的影响与MC-dSir2组相比,SC-dSir2的dSir2表达量更高,拯救率为100%,提示dSir2拯救品系构建成功。与MC-dSir2组相比,MHC-dSir2组的dSir2 mRNA表达量更高,上调率为42.00%;与SC-dSir2组相比,SHC-dSir2组的dSir2 mRNA表达量更高,上调率为67.65%。这些结果表明间歇性低氧训练促进dSir2 mRNA表达。与MC-dSir2组相比,ME-dSir2组的dSir2 mRNA表达量更高,上调率为78.00%;与SC-dSir2组相比,SE-dSir2组的dSir2 mRNA表达量更高,上调率为98.74%。这些结果表明规律运动训练促进dSir2mRNA表达。与MC-dSir2组相比,MHE-dSir2组的dSir2 mRNA表达量更高,上调率为91.00%;与SC-dSir2组相比,SHE-d Sir2组的dSir2 mRNA表达量更高,上调率为120.17%。这些结果表明间歇性低氧联合规律运动训练更显著促进dSir2 mRNA表达。3.2心脏功能结果3.2.1生命早期间歇性低氧联合规律运动与dSir2突变表达对果蝇心脏功能的影响NC-dSir2组果蝇的心率低于MC-dSir2组(P<0.01);NC-dSir2组果蝇的心动周期高于MC-d Sir2组(P<0.05);NC-dSir2组果蝇的缩短分数显著高于MC-dSir2组(P<0.01);NC-dSir2组果蝇的缩短分数显著高于MC-dSir2组(P<0.01);HC-dSir2组果蝇的心率低于NC-dSir2组(P<0.01);HC-dSir2组果蝇的心率低于MHC-dSir2组(P<0.01);MHC-dSir2组果蝇的心率低于MC-d Sir2组(P<0.01),;HC-dSir2组的心动周期高于NC-dSir2组(P<0.01);MHC-dSir2组果蝇的心动周期高于MC-dSir2组(P<0.05);HC-dSir2组的缩短分数高于NC-dSir2组(P<0.05);MHC-dSir2组果蝇的缩短分数显著高于MC-dSir2组(P<0.01);HC-dSir2组的缩短分数高于NC-dSir2组(P<0.05);MHC-dSir2组果蝇的缩短分数显著高于MC-d Sir2组(P<0.01);HC-dSir2组纤维性震颤低于NC-dSir2组(P<0.01);MC-dSir2组纤维性震颤与MHC-dSir2组没有显著差异(P>0.05)。NE-dSir2组的心率低于NC-dSir2组(P<0.01);NC-dSir2组果蝇的心率低于MC-dSir2组(P<0.01);NE-d Sir2组果蝇的安静心率低于ME-dSir2组(P<0.01);ME-dSir2组果蝇的心率显著低于MC-dSir2组(P<0.01);NE-dSir2组果蝇的心动周期高于NC-d Sir2组(P<0.01);NC-dSir2组果蝇的心动周期高于MC-dSir2组(P<0.05);NE-dSir2组果蝇的心动周期高于ME-dSir2组(P<0.01);ME-dSir2组果蝇的心动周期显著高于MC-dSir2组(P<0.01);NE-dSir2组果蝇的缩短分数高于NC-dSir2组(P<0.05);NC-dSir2组果蝇的缩短分数高于MC-dSir2组(P<0.01);ME-dSir2组果蝇的缩短分数高于MC-dSir2组(P<0.01);NC-dSir2组果蝇的纤维性震颤显著高于NE-dSir2组(P<0.01);NC-dSir2组果蝇的纤维性震颤与MC-dSir2组没有显著差异(P>0.05);MC-dSir2组果蝇的纤维性震颤显著高于ME-dSir2组(P<0.01)。与NC-dSir2组、HC-dSir2组、NE-dSir2组相比,HE-dSir2组果蝇的心率更低(P<0.01);与MHC-dSir2组、ME-dSir2组相比,MHE-dSir2组果蝇的心率更低(P<0.01);与HC-d Sir2组、NE-d Sir2组相比,HE-dSir2组的心动周期更高(P<0.01);与MHC-dSir2组、ME-dSir2组相比,MHE-dSir2组的心动周期更高(P<0.01);HE-dSir2组缩短分数高于NC-dSir2组(P<0.01),MHE-dSir2组缩短分数高于MC-dSir2组(P<0.01);HE-dSir2组纤维性震颤低于NC-dSir2组、HC-dSir2组、NE-dSir2组(P<0.01);MHE-dSir2低于MC-dSir2组(P<0.01)。3.2.2生命早期间歇性低氧联合规律运动与dSir2拯救表达对果蝇心脏功能的影响SC-dSir2组果蝇的心率低于MC-dSir2组(P<0.05);SC-dSir2组的心动周期大于MC-dSir2组(P<0.05);SC-dSir2组果蝇的缩短分数高于MC-d Sir2组(P<0.01);SC-dSir2组纤维性震颤与MC-dSir2组没有显著差异(P>0.05)。SHC-dSir2组果蝇的心率低于MHC-dSir2组(P<0.01);MHC-dSir2组果蝇的心率低于MC-dSir2组(P<0.01);SHC-dSir2组果蝇的心率低于SC-dSir2组(P<0.01);SHC-dSir2组的心动周期大于MHC-dSir2组(P<0.01);MHC-dSir2组的心动周期大于MC-dSir2组(P<0.05);SHC-dSir2组果蝇的心动周期大于SC-dSir2组(P<0.01);MHC-dSir2组果蝇的缩短分数高于MC-dSir2组(P<0.01),SHC-dSir2组果蝇的缩短分数高于SC-dSir2组(P<0.05);MHC-dSir2组纤维性震颤与MC-dSir2组没有显著差异(P>0.05),SHC-dSir2组纤维性震颤小于SC-dSir2组(P<0.05)ME-dSir2组果蝇的心率显著低于MC-dSir2组(P<0.01),SE-dSir2组果蝇的心率显著低于SC-dSir2组(P<0.01);ME-dSir2组的心动周期大于MC-dSir2组(P<0.01),SE-dSir2组果蝇的心动周期大于SC-dSir2组(P<0.01);SE-dSir2组果蝇的缩短分数高于ME-dSir2组(P<0.01);ME-d Sir2组果蝇的缩短分数高于MC-dSir2组(P<0.01);SE-dSir2组果蝇的缩短分数高于SC-dSir2组(P<0.01);ME-dSir2组果蝇的纤维性震颤低于MC-d Sir2组(P<0.01);SE-dSir2组果蝇的纤维性震颤低于SC-dSir2组(P<0.01)。MHE-d Sir2组的果蝇的心率比MHC-dSir2组、ME-dSir2组、MC-dSir2组更低于(P<0.01);SHE-dSir2组果蝇的心率比SHC-dSir2组、SE-dSir2组、SC-dSir2组更低(P<0.01);MHE-dSir2组果蝇的心动周期高于MC-dSir2组、ME-dSir2组、MHC-dSir2组(P<0.01);SHE-dSir2组果蝇的心动周期高于SC-dSir2组、SE-dSir2组、SHC-dSir2组(P<0.01);SHE-dSir2组的缩短分数高于MHE-dSir2组(P<0.01);MHE-dSir2组高于MC-dSir2组(P<0.01);SHE-dSir2组高于SC-dSir2组、SE-d Sir2组(P<0.05);MHE-dSir2组低于MC-dSir2组(P<0.01);SHE-dSir2组的纤维性震颤低于SC-dSir2组(P<0.01)、SHC-dSir2组(P<0.05)。4结论4.1间歇性低氧训练与规律运动训练调节生命早期果蝇的心脏节律,增强心脏泵血功能,降低纤维性震颤发生,提升果蝇的运动能力,与调节dSir2表达有关。4.2.间歇性低氧联合规律运动训练显著性调节生命早期果蝇的心脏节律,增强心脏泵血功能,降低纤维性震颤异常发生,促进果蝇的运动能力提高,与更显著调节dSir2表达有关。