丙肝病毒是一种正链RNA病毒,它是导致人类肝脏疾病的重要因素。在本文中,我们提出了一种新的抑制丙肝病毒复制和转录的方法,并构建了核酸电化学传感器进行了验证。同时,基于这一传感器的设计思路,我们又研制了可以快速、灵敏地检测NF-кB分子的传感器,为NF-кB的分析提供了一种新途径。1、抑制丙肝病毒复制与转录新方法的研究在本章中,我们提出了一种新的抑制丙肝病毒复制与转录的方法。通过引入一段体外的RNA,使其和丙肝病毒的基因组二者与miR-122的碱基互补配对总数达到12个,从而激活Ago2蛋白的内切酶活性,导致丙肝病毒基因组被切割,进而从其与Ago2蛋白和miR-122所形成的复合物中释放出来。由于失去了Ago2蛋白和miR-122的保护作用,释放出来的丙肝病毒基因组很容易被降解,因而有效地抑制了其复制和转录。为验证Ago2蛋白被激活,以及丙肝病毒基因组被切割,我们构建了一种电化学生物传感器。该传感器利用了S1核酸酶能够水解DNA-RNA杂交链的单链部分这一特点进行构建。通过该传感器我们发现只有当体系中引入这段体外的RNA,Ago2蛋白才能被激活。因此,该研究为抑制丙肝病毒的复制和转录提供了新的思路,对于丙肝的治疗将具有重要意义。2、基于核酸外切酶构建的核酸电化学传感器用于NF-кB的检测基于前述传感器的设计思路,我们对这一核酸电化学传感器进行了改进,以便用于NF-кB的快速检测。首先,将G-四连体序列与NF-кB特异性识别序列相结合共同修饰在电极上,然后,采用另外一种核酸外切酶—λ核酸外切酶对DNA分子进行切割从而产生G-四连体,最后,借助G-四连体结合血红素(hemin)所形成的复合物产生的电化学信号实现了NF-кB快速、灵敏、简便的电化学分析。