论文部分内容阅读
卵黄原蛋白是一种普遍存在于卵生非哺乳动物中的糖磷脂复合蛋白，该蛋白质在动物生殖发育过程中为胚胎发育提供营养和功能性物质，具有重要的生理功能。本研究克隆了脉翅目昆虫大草蛉卵黄原蛋白基因，探索了天敌昆虫大草蛉卵黄原蛋白基因的生理功能；同时本研究也克隆了大草蛉Housekeeping基因Actin，从转录和表达水平揭示了大草蛉卵黄原蛋白的发生过程；并进一步利用RNA干扰技术对卵黄原蛋白基因在大草蛉中的生理功能进行了系统研究。本研究获得的主要结果如下：1.利用RACE和RT-PCR技术从羽化后5-7d的雌成虫中克隆得到了大草蛉卵黄原蛋白编码基因。序列分析证实该卵黄原蛋白与其他昆虫卵黄原蛋白具有较高的同源性，具有卵黄原蛋白基因的各种保守结构域，将其命名为CSVg。2.利用RT-PCR和RACE技术克隆得到了大草蛉Actin基因，为大草蛉卵黄原蛋白基因的转录提供内参基因。RT-PCR鉴定表明在羽化后大草蛉雌雄虫中都存在卵黄原蛋白基因，在羽化后第4天大草蛉雌虫卵黄原蛋白基因开始转录，到第10天达到高峰，然后逐渐下降；在羽化后第4天的雄虫中也能检测到卵黄原蛋白基因的转录，但在不同时间内表达差异不显著。用ELISA对卵黄原蛋白的表达情况进行检测，发现卵黄原蛋白的表达与卵黄原蛋白基因的转录趋势相一致。3.选取大草蛉卵黄原蛋白基因4个不同区段的片段进行PCR扩增，成功构建了dsRNA原核表达载体并转化了大肠杆菌HT115，获得了CSVg dsRNA。4.通过显微注射将4个区段的CSVg dsRNA导入大草蛉成虫体内，以注射GFP dsRNA为对照，研究结果表明相比于对照，大草蛉卵黄原蛋白都有不同程度的降低，表明卵黄原蛋白基因被成功干扰；天敌昆虫大草蛉卵黄原蛋白基因生理功能研究表明：大草蛉雌虫卵黄原蛋白基因被干扰后，各处理组前5天的产卵总量和卵的孵化率都低于对照。