编码中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)和凡钠对虾(Litopenaeus vannamei)一种HSP70的cDNA研究

来源 :中国科学院大学(中国科学院海洋研究所) | 被引量 : 0次 | 上传用户:jshajhb1
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本文根据中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)EST序列信息设计引物,用RT-PCR方法,从经热休克处理的中国对虾的肝胰腺RNA中克隆到长2090bp的hsp70 cDNA序列,包括长1956bp的完整的编码序列(complete CDS)及部分5’端和3’端非翻译区(5’UTR和3’UTR)。PCR及测序结果分析显示hsp70 cDNA的1~547bp碱基所对应的基因组序列可能含有内含子,548~2090bp碱基所对应的基因组序列不含内含子。根据编码序列推导出相应的652个氨基酸,与其他真核生物HSP70家族成员进行同源性比较,发现中国对虾HSP70与虹鳟(Oncorhynchus mykiss)HSC71、人(Homo sapiens)HSC70、家鼠(Mus musculus)HSP70、烟草天蛾(Manduca Sexta)HSC70的同源性分别是85.9%、85.9%、85.8%、85.4%,表现出较高的保守性。 同时确定了编码凡纳对虾(Litopenaeus vannamei)hsp70的cDNA序列,对凡纳对虾、中国对虾hsp70进行了比较,两种对虾HSP70碱基序列相似性为97%,共有60个碱基的差别,编码区内的碱基差异大部分简并密码子内部差异,即不改变所编码氨基酸种类;氨基酸同源性为99.8%,只有一个氨基酸的差别,即第483位氨基酸中国对虾为丝氨酸,而凡纳对虾为天冬酰氨,这个氨基酸差异位于HSP70的底物肽结合结构域。上述结果表明hsp70在对虾种间具有很强的保守性。 为了研究中国对虾hsp70的转录表达,发展了半定量RT-PCR方法,对hsp70转录表达分析显示,hsp70 mRNA在中国对虾正常肝胰腺、肌肉、眼柄组织存在组成性表达;在受到整体热休克后的对虾肌肉、肝胰腺、眼柄组织hsp70转录水平增加。处于热休克温度下168小时(7天)的中国对虾,其肌肉组织hsp70 mRNA依然高于正常对照水平。因此本文所克隆的中国对虾hsp70是一种无明显组织特异性的组成性表达的基因,其转录表达能被某些应激(如热休克)进一步诱导,使转录水平在本底基础上提高。 对主要病原微生物WSSV及鳗弧菌感染下的中国对虾hsp70转录表达进行了研究。投喂感染法使对虾感染WSSV病毒,对虾发病后处于濒死状态时检测其肝胰腺组织hsp70 mRNA水平,发现明显低于正常对照组。但对经注射WSSV病毒及焦传珍编码中国对虾和凡纳对虾一种卜IsP70的cONA研究博士学位论文鳗弧菌后不同时间的对虾肌肉组织进行hsl770 mRNA水平检测,未发现两种病原感染不同时间后hsl刃0表达的明显规律。对不同发育时期的中国对虾全虾h胡70mRNA进行检测,从PH仔虾开始到再生长3个月这段发育时期,结果显示全虾hs价0 mRNA的表达趋于下降。
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