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探索调控牙胚组织诱导成牙潜能的分子机制对机体颅面正常生长发育以及牙齿的再生具有重大意义。本实验通过组织重组技术,检测经过0h、24h、36h器官培养后的E14.5小鼠胚胎下领磨牙间充质组织的成牙潜能的变化,研究发现随着器官培养时间的延长间充质的成牙潜能逐渐丢失,并且牙齿发育也变慢。RT-PCR检测经过0h和24h器官培养后的E14.5小鼠胚胎下颌磨牙间充质组织中生长因子表达量的变化,发现参与牙齿发育的生长因子表达发生了较大的变化,在检测的Hgf, Igf1,Bmp3, Bmp5, Bmp6,, Tgfb1, Bmp2, Bmp4, Bmp, Wnt3, Wnt4, Wnt5a, Wnt6,Wnt10a, Wnt10b, Fgf9, Fgf10, Follistatin, ActivinβA, Midkine, Shh这些影响牙齿发育的生长因子中,除Bmp2不表达和Wnt3, Wnt10a, Wnt10b, Shh表达略有上升外,Hgf, Igf1, Bmp3, Bmp5, Bmp6, ActivinβA, Midkine, Tgfb1, Bmp2, Bmp4,Bmp7, Wnt4, Wnt5a, Wnt6, Fgf9, Fgf10, Follistatin表达均出现不同程度的下降,表明培养后成牙潜能的丢失可能与生长因子表达下降有关。是否提高生长因子的表达可以部分挽救成牙潜能的丢失?作者选择了表达量下降最为明显的三个生长因子Wnt5a, ActivinβA和Igf1进行研究。经查,除了ActivinβA基因没有可变剪接体外,Wnt5a和Igf1基因都有多个可变剪接体。分析发现,牙间充质组织中Wnt5a产生两个亚型(Wnt5a variant 1和Wnt5a variant 2), Igf1产生四个亚型(Igf1 variant 1、Igf1 variant 3、Igf1 variant 4和Igfl variant 5)。将Activin βA、Wnt5a亚型1、Wnt5a亚型2和Igf7亚型4克隆到四环素调控的慢病毒载体上。由于过表达Activin βA载体无法生产出慢病毒,因此将24h器官培养后的E14.5小鼠胚胎下颌磨牙间充质分别感染Wnt5a亚型1、Wnt5a亚型2、Igf1亚型4和同时感染Wnt5a亚型1、2。感染慢病毒的牙间充质在确认基因过表达后与E14.5上皮组织重组,移植到小鼠体内培养。通过组织切片分析发现：与对照组相比,分别过表达Wnt5a亚型1和亚型2成牙率略微上升。同时过表达Wnt5a亚型1、亚型2对成牙率没有影响。过表达Igf1亚型4造成成牙率轻微下降。但是过表达Wnt5a亚型1或/和Wnt5a亚型2对牙齿的生长状况和牙釉质的形成有一定的影响。