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前言 艾滋病，即获得性免疫缺陷综合症(Acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)，是由人类免疫缺陷病毒(Human immunodefi-ciency virus，HIV)引起的一种免疫缺陷性疾病。本病经血液、性活动和母婴等途径传播，我国自1985年发现首例艾滋病以来到2001年12月已有约85万HIV感染者。虽然在HIV-1感染中，细胞因子及相应的免疫反应类型对其病理过程和预后的影响目前还有争论，但国内外多数学者认为Ⅰ类细胞因子和与之相应的超强细胞免疫反应是阻止HIV感染和病情进展的主要因素，而调整细胞因子稳态，抑制Ⅱ类细胞因子分泌和过强的抗体反应，创造一个持续的以细胞免疫为主导的内环境是控制HIV／AIDS的重要组成部分。 根据文献报道，香菇多糖(lentinan，LNT)能够调节肿瘤患者的免疫功能，其调节作用主要与其改变体内某些细胞因子及其受体水平有关。本研究拟通过体外实验将香菇多糖分别与正常人的和感染HIV-1的外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell，PBMC)共培养，测定培养上清中细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-10、TNF-α含量，探讨香菇多糖对感染HIV-1的细胞分泌细胞因子的作用，从而为HIV／AIDS治疗探索新的途径。 材料与方法 1．材料及来源PBMC分别从8名健康献血员新鲜抗凝血中提取（肝素抗凝20IU／Inl人 HIV－ISF13毒株由中国预防医学科学院病毒研究所惠赠，病毒u抗原定量为500n才Inl。香菇多糖为南京制药厂针剂产品，使用前用含10％小牛血清的RPMI－1640培养液稀释至实验浓度。IL－2、IL－12、IFN－y、IL－4、IL－10、TNF－a ELISA检测试剂盒均为晶美生物工程有限公司分装美国 Ge…e公司产品。 入香菇多糖的体外实验浓度的选择 根据临床用药量计算血浆药物峰值浓度：取这个浓度的1．2户J＊6倍稀释，采用Mh法分另检测每个浓度下香菇多糖对PBMC是否具有毒性：将PBMC与药物于 37t 5％COZ中共培养 60 ／J’时，加人 Mrt瞩、’oat广0小时后 ’009离心，弃上清加人 200atnnso，待甲管晶体溶解后于10分钟内在570urn处读取吸光度值，加药物组的吸光度与对照组（未加药物）的比值在0．9刁j之间认为药物对细胞生长没有影响，即无毒性。最后选择无毒性的最大浓度和它的0、l倍作为实验浓度。 3．ELISA方法检测人PBMC分泌细胞因子 提取献血员PB－MC，Tpan－blue计数活细胞大于 95％，作为健康人的 PBMC；同时提取同一个献血员的PBMC，接种HIV－ISgy3毒株，作为感染HIV的 PBMC，调整两者细胞浓度至 2 X 10Vml，采用 sllg／ml植物血凝素PHA，Sia公司，美国）刺激。在24孔培养板上加入空白对照、高浓度香菇多糖和低浓度香菇多糖，分别加人健康人PB－MC和感染HIV的PBMC。按照前期实验所得条件共培养于37℃5畅 COZ 中，60 ／J’时后 8009 离心收集上清，分另用 IL－2、IL－12。IFN－Y、IL－4、IL－10、TNF－a ELISA检测试剂盒定量上清液中的细胞因子（方法按照试剂盒说明书进行人 ·2· 结 果 二．香菇多糖的体外实验浓度 取0．4U才ml的香菇多糖作为＊＊r检测药物毒性的起始浓度，＊／S＊6倍稀释后证明均无毒性。选择o．4Ugllnl和o．04吟all两个浓度作为本实验的实验浓度。 2．感染HIV一二前后PBMC分泌细胞因子的变化 健康人PBMC在感染HIV后分泌IL－2、IL－12、InN－Y减少，而IL－4、IL－10、TNF－a分泌增加。 3．香菇多糖对健康人PBMC分泌细胞因子的影响 1）健康人PBMC与不同浓度的香菇多糖共培养60小时后，显示IL－2＊ J2＊－Y的分泌量较未加药物组明显增加P＜o．05人且表现出浓度依赖关系，即IL－2＊L－12＊ry－Y的分泌量随香菇多糖浓度的增加而增加。 2）健康人PBMC与不同浓度的香菇多糖共培养60小时后，显示IL－4＊－10 JTNJTNF－。的分泌量较末加药物组明显减少沙＜0．05），且表现出浓度依赖关系，目IL－4、IL－10、TNF－a的分泌量随着香菇多糖浓度的增加而减少。 4．香菇多糖对感染HIV河的PBMC分泌细胞因子的影响 1）感染 HIV的 PBMC与不同浓度的香菇多糖共培养 60小时后，显示 IL－2＊L－12＊ry－Y的分泌量较未加药物组明显增加（P＜0．05），且表现出浓度依赖关系，目 几一2、IL－12、1刚一Y的分泌量随所加香菇多糖浓度的增加而增加。 2）感染 HIV的 PBMC与不同浓度的香菇多糖共培养 60小时后，显示 IL－4、IL－10／YNF－a的分泌量较未加药物组明显减少（P＜o．05），且表现出浓度依赖关系，DIL－4、IL一二o、TNr－a的分泌量随着香菇多糖浓度的增加而减少。 ·3· 讨 论 细胞因子是体内的一类生物活性物质，根据细胞因子在体内发挥免疫调节作用的不同可分为两类：I类细胞团于刺激’fbi细胞增殖，上调细胞免疫反应，辅助清除体内感染了病毒的细胞，以几一2＊L叫＊－Y为代表；11类细?