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植物种质资源的保存是生物多样性保护的重要方面,超低温保存作为长期保存顽拗性种子和中间型种子的唯一有效方法,一直是种子资源保存研究的热点。近年来,随着超低温保存技术的日渐成熟,超低温耐性的生理生化基础与发育机理也日益受到人们的关注。前人对顽拗性种子和正常性种子超低温耐性的发育已经有一些研究,但是尚未见中间型种子超低温耐性发育的研究报道。 葡萄柚种子是一种中间型种子,我们采集处于不同发育时期的葡萄柚种子为材料,对中间型种子发育过程中的脱水耐性和超低温耐性获得进行研究,比较不同发育时期胚细胞的超显微结构,检测不同发育时期种子中与脱水耐性和超低温耐性获得相关的糖、脂、蛋白这类大分子物质含量。从而建立中间型种子超低温耐性的发育模式,分析超低温耐性发育过程中细胞结构和大分子物质的变化,以探究中间型种子超低温耐性发育的生理基础。结果表明,葡萄柚种子的超低温耐性是在发育过程中逐渐获得的,发育早期的葡萄柚种子不耐超低温处理,葡萄柚种子在发育中期获得超低温耐性,并自此保持很好的超低温耐性一直到种子完全成熟,这种超低温耐性发育模式与正常性种子相似。随着种子的发育,胚细胞的形态和保护物质的含量发生明显的变化,这些变化与种子超低温耐性的获得密切相关。电镜观察显示,发育前期的胚细胞中细胞器较多,代谢活跃,不能耐受超低温处理;发育后期的胚细胞中积累大量的保护性物质,代谢活动减弱,可以保护细胞免受低温伤害。种子中可溶性糖含量像正常性种子一样随着种子超低温耐性的发育逐渐升高,脂类、可溶性蛋白和热稳定蛋白的含量又像顽拗性种子一样,在发育前期随种子超低温耐性的发育逐渐升高但在发育的后期有所降低。 除此之外,还对葡萄柚种子超低温保存的保存方案进行了研究,结果发现胚轴脱水后进行超低温保存可获得的最大冻融后成苗率为95%,但是使用硅胶对整粒种子快速脱水后超低温保存可获70%的成苗率,既经济又有效,是最适合的方法。最后,本研究还对实验品种小甜柚适宜的萌发环境进行了探究,为以后小甜柚品种的推广提供引种依据。