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本文对钙网蛋白N50在毕节酵母中的表达、初步纯化及生物活性测定进行了研究。文章以实验室保存的pET-N58为模板应用PCR技术扩增了CRTN区编码122-171位氨基酸的DNA片段,克隆至酵母表达载体pPIC9K中,获得含N50基因的重组质粒pPIC9K-N50,电激转化毕节酵母GS115,通过G418抗性筛选高拷贝整合的转化子,构建了能表达N50蛋白的毕节酵母工程菌GS115。SDS-PAGE结果显示,在甲醇诱导下,N50基因在GS115中获得表达,表达产物分泌到胞外。光密度扫描分析估算,表达产物约占分泌蛋白的25.7%。发酵液上清经SP-SepharoseFastFlow离子交换层析纯化,纯度可达87.1%。用MTT法、CAM血管生成法检查表达产物对内皮细胞增殖,血管生成的抑制作用,结果证明表达的N50蛋白能抑制人脐静脉内皮细胞的增殖和CAM血管的生成,但活性与N58相比,明显降低,说明CRTN58的抑制内皮细胞增殖和抗血管生成的活性位点应包括被缩短的9个氨基酸,缺失这9个氨基酸会影响其活性。