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小G蛋白家族成员Rho与细胞内信号关系重大。Rho家族主要参与细胞骨架机化和基因表达的调节。与其它Rho GTP酶一样,Rho通过具有活性的GTP结合状态和无活性的GDP结合状态扮演分子开关的角色。作为最具特征的Rho下游效应器,Rho激酶(ROCK),能够对为数众多的细胞功能进行调节。包括迁移、分裂、凋亡、黏附、吞噬。ROCK包含2种亚型:ROCK I和ROCK II。人的ROCK I和ROCK II的基因表达分别定位在18号染色体和2号染色体上。二者具有高度相似性,在氨基酸序列上具有65%的相似性;在它们的激酶结构域上具有92%的相似性。虽然ROCK具有2种亚型,但在目前的研究中还未显示出其中的差异。吡啶衍生物Y-27632是一种广泛使用的Rho激酶抑制剂。Y-27632作为一种具有细胞穿透性的ATP竞争抑制剂,在体外研究证实,它能够有效抑制ROCK I和ROCK II。因此,Y-27632是一种理想的选择性ROCK抑制剂,成为了研究生理事件中Rho激酶作用的理想工具。本试验以小鼠胚胎干细胞为实验材料,通过ROCK抑制剂Y-27632的使用,从多方面探讨了Y-27632在小鼠ES细胞方面产生的生物学效应。获得了一些基础性的研究资料。Y-27632能够引起ES细胞形态发生改变,通过Y-27632的添加能够使质地紧密的ES细胞集落变得松散、扁平。将Y-27632应用于ES细胞传代,能够显著提高传代效率。并且,在Y-27632长期存在的条件下,ES细胞依旧维持稳定的染色体数目,较强的碱性磷酸酶活性,在体内能够分化形成畸胎瘤,在体外能够分化形成心肌细胞。证明Y-27632不会对小鼠ES细胞的多能性造成影响,能够安全用于小鼠ES细胞的相关操作。在嵌合体小鼠生产中,通过Y-27632对细胞进行短期处理能够获得理想的细胞状态,细胞呈球形且质地柔软,便于注射针进行筛选与收集,从而缩短体外显微操作时间。并且,Y-27632的使用不会影响嵌合体小鼠生产效率。在ES细胞衍生方面,通过accutase结合Y-27632的使用,能够显著提高ES细胞亚克隆的产生,从而建立起了一种简便有效的小鼠ES细胞分离方法。并且,获得的ES细胞系符合生物学检验标准并能够稳定传代。