目的:1)构建Aβ42聚集多方法表征平台,并以此筛选合适的Aβ42试验材料;2)探究不同厂家IVIG制品中Aβ42抗体含量及干预Aβ42的聚集能力的差异;3)探究IVIG制品中apoE4抗体经作用于apoE4间接干预Aβ42聚集的能力。方法:1)正交分析Aβ42与ThT浓度对测得Aβ42聚集曲线荧光增强倍数F的影响,据此优化动态ThT荧光检测方法;在前期研究基础上,通过对比10和100 μM浓度下的检测效果,获得取点ThT荧光检测法最佳β42检测浓度;通过对比15、30、60 μM 3个浓度下的检测效果,获得远紫外CD光谱法最佳Aβ42检测浓度;不同聚集时间Aβ42聚集物种类通过SDS-PAGE进行,分析对比;不同聚集时间Aβ42聚集物形貌通过TEM分析。2)利用上述方法构建的检测平台,分析现有市售A、B、C、D 4种Aβ42的聚集能力。3)EL1SA法检测不同厂家IVIG制品中的Aβ42抗体含量;其干预Aβ42的聚集能力通过动态ThT荧光法对比分析。4)动态ThT荧光法对比分析有无apoE4抗体条件下 apoE4对Aβ42聚集的干预效果;通过发光ATP检测法分析有无apoE4抗体条件下apoE4干预形成Aβ42聚集物对SH-SY5Y细胞的毒性;Western blot检测IVIG制品中有无apoE4抗体。结果:1.初步构建本试验室Aβ42聚集表征平台(5种检测方法)。1)动态ThT荧光法存在最佳Aβ42、ThT浓度配比,如Aβ42浓度为10 μM时,配合以9-18 μM ThT可呈现更高的荧光增强倍数。2)取点ThT荧光法在10 μM进行时更为清晰地反映聚集初期荧光强度的上升趋势,以此作为Aβ42检测浓度。3)远紫外CD在β0μM进行时可以保证充分的CD负峰高度和较少的用量,以此作为Aβ42检测浓度。4)SDS-PAGE测得条带所能达到的最高分子量随Aβ42聚集时间增加而升高,于4 h时进入平台期。5)聚集8 h后,TEM可观察到Aβ42形成的原纤维。2.所建平台多方法一致显示市售4种Aβ42聚集能力的差异。相对于Aβ42-A、C、D,Aβ42-B呈现出典型的“S”形聚集曲线;其12 h聚集物形成更高的CD值负峰,为-8.09 mdeg,与更高的荧光强度,为7.79;SDS-PAGE显示,所有12 h聚集物均含有单体和十一聚体,但A形成了二聚体,B、C和D呈现出从二聚体到三聚体的梯形分布;Western blot则显Aβ42-B聚集形成分子量更高的二聚体和三聚体;TEM显示,仅有Aβ42-B聚集形成了原纤维。以上均提示Aβ42-B聚集能力最强。3.1)ELISA法测得5厂家IVIG制品中Aβ42抗体含量自2.08至84.24 μg/mL,差异明显。2)动态ThT荧光法显示IVIG制品中所涉两种稳定剂在检测浓度范围内对Aβ42聚集不产生干扰;并测得3个浓度水平条件下5厂家IVIG均未表现出对Aβ42聚集抑制作用的统一的强弱趋势,且未显示与其Aβ42抗体含量之间明显的关联。4.1)apoE4呈浓度依赖地压制Aβ42聚集曲线,以及CD负峰高度。2)apoE4抗体使得apoE4压制的聚集曲线发生抬升。3)发光ATP法测得,apoE4干预形成的Aβ42聚集物对SH-SY5Y细胞的毒性对其浓度升高而增强,而apoE4抗体与apoE4共同干预形成的Aβ42聚集物对SH-SY5Y细胞的毒性明显减弱。4)Western blot检测显示3厂家IVIG均含有apoE4抗体。结论:1)构建了本试验室的Aβ42聚集表征多方法平台;利用此平台揭示了市售Aβ42材料聚集能力的差异,选择Aβ42-B作为试验材料。2)Aβ42抗体含量及抑制Aβ42聚集的能力于IVIG制品之间存在差异,且两者无明显联系,提示临床试验前应对IVIG的抗Aβ能力进行评估,但方法需进一步探讨。3)apoE4抗体减弱apoE4对Aβ42聚集的抑制并最终造成Aβ42对细胞毒性的降低;IVIG中含有apoE4抗体,提示IVIG存在相应作用途径对APOE-ε4基因患者亚群产生更好疗效。