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目的:筛选能够特异识别兔源间充质干细胞的核酸适配体,用于通用适配体识别多种来源间充质干细胞的初步应用探究和适配体用于间充质干细胞细胞功能亚群分型的探究。方法:从幼兔股骨骨片分离培养得到间充质干细胞并对其进行成骨、成脂定向诱导鉴定证明其多向分化潜能;以分离得到的兔源间充质干细胞为筛选靶标,利用细胞SELEX技术分别筛选与细胞表面结合、细胞表面蛋白结合、以及自主细胞内化的三组核酸适配体;经八轮筛选,利用共聚焦对第五轮和第八轮次级文库的富集情况进行验证,已富集文库连接pGM-T载体进行克隆、测序,利用RNA structure、MEME软件分析获得候选序列,利用流式细胞术和共聚焦对候选序列进行结合实验,验证其结合兔源间充质干细胞的特异性;同时利用流式细胞术对结合适配体的间充质干细胞进行了细胞膜通透性测试;挑选其中结合力较强的5-1-9,利用流式分选收集与5-1-9结合的阳性细胞和阴性细胞,培养后利用共聚焦比较分选得到的阳性和阴性细胞与序列5-1-9的结合强弱;为拓展所得适配体的进一步应用,利用流式细胞术检测细胞表面和与细胞表面蛋白结合的多条候选适配体与兔、大鼠、人来源的间充质干细胞的结合情况。结果:本实验从幼兔股骨骨片分离的间充质干细胞,经成骨和成脂定向诱导染色证明分离得到的间充质干细胞具有向成骨、成脂定向分化的潜能;以自行分离的兔源间充质干细胞活细胞为靶细胞,经过八轮细胞SELEX筛选。激光共聚焦显微镜鉴定结果表明,三组不同结合位点的ssDNA次级文库中第五轮与细胞表面结合和与细胞表面蛋白结合的次级文库以及第八轮细胞内化的次级文库都有一定程度的富集;进一步对富集文库进行挑克隆测序得到的51个阳性克隆经序列比对分析,三组ssDNA各挑选5条候选适配体,利用流式细胞术/激光共聚焦显微镜比较其与靶细胞的结合强弱,发现与细胞表面结合的5-1-9、5-1-12、5-1-19和与细胞表面蛋白结合的5-2-4、5-2-9、5-2-13以及细胞内化的8-3-2、8-3-15、8-3-19与靶细胞结合相对较强;细胞膜通透性测试证明,FAM标记的单一序列结合的间充质干细胞绝大多数为活细胞;利用序列5-1-9分选的细胞经激光共聚焦显微镜鉴定阳性细胞比阴性细胞结合5-1-9荧光强度强;并且5-1-9、5-1-12等多条适配体不仅结合兔源间充质干细胞,还可以识别大鼠和人来源间充质干细胞。结论:本实验利用活细胞SELEX筛选获得了与兔源间充质干细胞结合的多条核酸适配体,且还可以识别大鼠、人来源的间充质干细胞;序列5-1-9能够用于间充质干细胞细胞亚群分选的应用。