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目的探讨Notch在三邻甲苯基磷酸酯(Tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP)诱发SH-SY5Y细胞神经毒性中的关系,进一步阐述TOCP神经毒性的作用机制。方法1.以不同浓度TOCP(0、0.25、0.50、1.0m M)处理SH-SY5Y细胞,同时设计平行实验,先用DAPT预处理SH-SY5Y细胞30min,再用TOCP(0、0.25、0.50、1.0m M)染毒处理48h,用MTT方法检测两种处理对SH-SY5Y细胞存活率的影响;Western Blot检测细胞蛋白表达水平。2.DAPT预处理SH-SY5Y细胞30min,再染毒0.50m M TOCP 24h,收集细胞(以0.1%DMSO为对照组),Western Blot检测自噬蛋白Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白水平;用自噬泡特异性染色剂MDC进行细胞染色,观察各组自噬泡的变化。3.采用全反式维甲酸诱导SH-SY5Y细胞分化,DAPT预处理未分化和已分化的SH-SY5Y细胞30min后,用0.50m M TOCP染毒24h,以DMSO为对照组,Western Blot检测NF-H,tau,p-tau蛋白表达量。4.采用DAPT预处理SH-SY5Y细胞和sh-Beclin1细胞30min,再用0.50m M TOCP染毒24h,Western Blot检测两组细胞系凋亡相关基因Bcl-2,BAX,Casepase-3蛋白表达。结果1.与对照组相比,随着TOCP浓度增加,TOCP染毒组和DAPT预处理后染毒TOCP组,细胞存活率都随之下降,但采用DAPT预处理阻断Notch,再进行0.25m M,0.5m M TOCP染毒组的细胞存活率比单独TOCP染毒组高(P<0.05),而当TOCP染毒浓度为1.0m M时,与相应DAPT预处理组比较,存活率无显著性差异(P<0.05)。2.TOCP染毒组和DAPT预处理后染毒TOCP组抑制SH-SY5Y细胞Notch信号通路相关蛋白NIC1和Hes1蛋白表达(P<0.05),而DAPT预处理组的NIC1和Hes1蛋白表达更低(P<0.05)。3.DAPT预处理SH-SY5Y后TOCP染毒组以及0.50 m M TOCP染毒组与对照组比较,DAPT预处理组Beclin1和LC3表达受抑制(P<0.05)。MDC染色结果显示,DAPT预处理+0.50 m M TOCP染毒组产生的自噬泡数量比单独TOCP染毒组减少。4.与对照组比较,DAPT预处理未分化和已分化SH-SY5Y细胞后再进行TOCP染毒,比单独0.50m M TOCP染毒,NF-H蛋白表达水平上升(P<0.05),但DAPT预处理组tau蛋白水平下降(P<0.05),而p-tau在0.50m M TOCP染毒组表达量最低(P<0.05)。5.DAPT预处理SH-SY5Y细胞和sh-Beclin1细胞和0.50m M TOCP染毒,以DMSO为对照组,Western blot检测相关凋亡蛋白,SH-SY5Y细胞中bcl-2/bax以及Cleaved-caspase-3蛋白表达无显著性差异(P<0.05)。在sh-Beclin1细胞中,DAPT预处理+0.50 m M TOCP染毒组的bcl-2/bax比值比单独0.50m M TOCP染毒高(P<0.05)。结论1.TOCP可抑制Notch信号通路NIC1和Hes1蛋白表达。2.DAPT阻断Notch信号通路后,可以一定程度上抑制TOCP诱导的细胞自噬。3.TOCP可降低未分化和已分化细胞骨架蛋白NF-H的水平,DAPT阻断Notch信号通路后,可抑制NF-H蛋白减少。