麦粒灸保护自发性高血压大鼠主动脉血管内皮Rho/ROCK信号通路机制

来源 :南京中医药大学 | 被引量 : 9次 | 上传用户:tony33334444
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目的:观察麦粒灸对自发性高血压大鼠(SHR)的治疗效应,探讨麦粒灸通过调控Rho/ROCK信号通路抗SHR血管损伤的作用机制。方法:将SHRs随机分为模型组和麦粒灸组,Wistar Kyoto大鼠(WKY)大鼠设为空白组,观察艾灸对SHRs的治疗效应。干预前测量各组大鼠血压,并记录。模型组、空白组大鼠常规抓取固定不做其他干预,每日1次,连续28天。麦粒灸组每天抓取固定后于同一时间段取“足三里穴”“曲池穴”进行麦粒灸治疗,每穴灸5壮,艾炷烧至约剩1/3时撤去,每日1次,连续28天。末次实验干预结束,再测各组血压值并记录。用10%水合氯醛麻醉大鼠,取血和主动脉。用比色法测各组大鼠血清SOD、MDA。NO含量观察艾灸抗SHR氧化应激效应。用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中IL- IL-10、hs-CRP及ICAM-1的含量观察艾灸抗炎作用。用日式全自动生化分析仪检测大鼠血清TG、CHOL、HDL、LDL、 ox-LDL的含量观察艾灸的降脂作用。用HE染色观察各组大鼠主动脉形态学改变,用代谢组学技术观察SHR与正常大鼠代谢物的改变,用Real-Time RCR和Wwstern Blot的方法检测大鼠主动脉Rho/ROCK信号通路相关基因与蛋白的表达。结果:(1)血压:实验干预前,模型组大鼠血压高于空白组(P<0.01),麦粒灸组大鼠血压高于空白组(P<0.01),模型组与麦粒灸组组间无差异(P>0.05)。实验结束后,空白组大鼠血压与实验前无明显变化(P>0.05)。与空白组相比,模型组大鼠血压升高,差异有统计学意义(P<0.01),与模型组相比,麦粒灸组血压降低,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)氧化应激相关指标:与空白组大鼠相比,模型组大鼠血清MDA升高,而SOD含量下降,差异均有统计学意义(P<0.01)。麦粒灸组大鼠血清MDA升高,而SOD含量下降,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组大鼠相比,麦粒灸组大鼠血清MDA下降,而SOD含量上升,差异均有统计学意义(P<0.01)。(3)NO含量:与空白组大鼠相比,模型组大鼠血清NO含量下降,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组大鼠相比,麦粒灸组大NO含量上升,差异有统计学意义(P<0.01)。(4)血脂:与空白组大鼠相比,模型组大鼠血清TG、CHOL、LDL、ox-LDL升高,而HDL下降,差异均有统计学意义(P<0.01)。麦粒灸组大鼠血清TG、CHOL、LDL、HDL含量与空白组无明显差异(P>0.05)。与模型组大鼠相比,麦粒灸组大鼠血清TG、CHOL、 LDL、ox-LDL下降,而HDL上升,差异均有统计学意义(P<0.01)。(5)炎性因子:与空白组大鼠相比,模型组大鼠血清IL-6、IC AM-1、hs-CRP升高,而IL-10下降,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组大鼠相比,麦粒灸组大鼠血清IL-6、ICAM-1、 hs-CRP下降,而IL-10上升,差异均有统计学意义(P<0.01)。(6)HE染色:与模型组相比,麦粒灸组大鼠仅出现较轻微血管结构损伤情况,可见部分内皮细胞脱落,中膜弹性纤维形态不规则,出现部分断裂。(7)血清代谢组学:通过主成分分析PCA得分图能够将正常组、模型组、麦粒灸组大鼠血浆代谢产物很好地聚类区分,差异代谢化合物27种,主要归类为氨基酸代谢物、糖代谢、脂代谢异常。(8) RT-PCR结果:与空白组相比,模型组Rho/ROCK通路的RhoA、ROCK1、VEGF、 VEGFR2、MLC基因表达均上升,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,麦粒灸组RhoA、ROCK1、VEGF、VEGFR2、MLC基因表达下降,差异有统计学意义(P<0.01)。(9)WB结果:与空白组相比,模型组Rho/ROCK通路的RhoA、ROCK1、VEGF2、 MLC蛋白表达均上升,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,麦粒灸组RhoA、 ROCK1、VEGF、VEGFR2、MLC蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:(1)麦粒灸能够降低自发性高血压大鼠血压,并且具有抗氧化应激、抗炎、降血脂、保护血管内皮功能的作用。(2)代谢组学技术能够将空白组、模型组、麦粒灸组大鼠成功鉴别区分。自发性高血压大鼠体内存在物质代谢异常,主要表现在氨基酸代谢、糖代谢、脂类代谢的异常。(3)麦粒灸通过抑制主动脉Rho/ROCK信号通路实现对高血压状态下血管内皮的保护作用。
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