中间锦鸡儿CiCPK32基因的克隆与功能分析

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:wangsong1st
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钙依赖型蛋白激酶(Calcium dependent proteinkinase,CDPK/CPK),广泛存在于植物和原生生物中,作为Ca2+的受体蛋白和效应蛋白在信号转导过程中起着关键的作用。并且,CPKs在植物正常生长和抵抗逆境过程中具有重要作用。中间锦鸡儿(Caragana intermedia),具有耐旱、耐寒、耐高温、耐盐碱特点,是我国北方荒漠化地区的优良造林树种。本研究以中间锦鸡儿为材料,通过RACE技术克隆到一个CiCPK32基因,并对其在不同胁迫响应中所发挥的功能做了初步的研究,结果如下:1.CiCPK32基因cDNA长2074bp,开放阅读框长1566bp,编码521个氨基酸,预测的蛋白的分子量为58.91kD。经氨基酸序列比对与系统进化分析显示,该蛋白与拟南芥CPK32(AT3G53040)一致性达77%,因此将其命名为CiCPK32。2.通过实时荧光定量PC R对CiCPK32基因在不同逆境胁迫下表达量进行了检测,结果显示该基因受干旱、ABA、高盐等处理的诱导,推测该基因可能与中间锦鸡儿响应逆境胁迫机制有关。3.构建了过表达载体p35S::CiCPK32-HA,并将其转化野生型拟南芥。经过qRT-PCR检测发现,转基因拟南芥纯合体株系中CiCPK32基因表达均有不同程度的增加。4.在400mM甘露醇、100mMNaCl和0.4μMABA处理下,CiCPK32基因过表达拟南芥的萌发率均高于对照;在12μMABA处理下,CiCPK32基因过表达拟南芥根长均高于对照。5.三周龄的CiCPK32基因过表达拟南芥的失水率低于对照;干旱处理后过表达株系的存活率明显高于对照。6.在100μm ABA处理后,各过表达株系中参与胁迫响应基因的表达均上调。综上所述,CiCPK32正调控拟南芥对干旱和盐胁迫的耐受能力。
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