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目的 研究不同病理类型的宫颈组织及宫颈癌细胞中miR-135a-5p、GATA3和STAT3的表达并分析三者表达的相关性,探讨宫颈癌中miR-135a-5p通过靶向作用于转录因子GATA3进而影响STAT3的表达的机制,分析宫颈癌组织中miR-135a-5p和GATA3 mRNA的表达与临床病理参数的关系。方法 选取2014年9月~2017年9月唐山市工人医院收治的因宫颈病变及其他良性疾病行手术治疗的标本共155例,严格按照标本的纳入及排除标准选取,所有标本均由实验人员与医院病理科医师共同确认病理分级和类型,包括正常对照组37例,低级别鳞状上皮内病变即CINⅠ组39例,高级别鳞状上皮内病变即CINⅡ-Ⅲ组42例及宫颈癌(CSCC)组37例。采用RT-qPCR法检测正常对照组及CSCC组、人正常宫颈上皮细胞(HcerEpic)、HeLa及SiHa宫颈癌细胞中miR-135a-5p、GATA3及STAT3 mRNA的表达水平,并分析宫颈癌组织中miR-135a-5p、GATA3和STAT3 mRNA表达的相关性;免疫组织化学法检测不同病理类型宫颈组织中GATA3和STAT3的表达;Western Blot法检测HcerEpic、HeLa和SiHa细胞中GATA3和STAT3的蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-135a-5p与GATA3 3’非翻译区(UTR)间的作用;在HeLa细胞中转染miR-135a-5p inhibitor敲低miR-135a-5p的表达,通过RT-qPCR法及Western Blot法检测敲低miR-135a-5p后HeLa细胞中GATA3及STAT3 mRNA和蛋白水平的表达情况;分析miR-135a-5p和GATA3 mRNA的表达与宫颈癌临床病理参数的关系。结果 1 RT-qPCR结果显示:miR-135a-5p在CSCC组及HeLa、SiHa细胞中的表达水平明显上调(P<0.01,P<0.05,P<0.05);GATA3 mRNA表达水平随着宫颈病变程度的加重而降低,CINⅡ-Ⅲ和CSCC组与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05);STAT3 mRNA的表达水平随着宫颈病变程度的加重而升高,差异有统计学意义(P<0.05);进一步进行免疫组化实验,结果与RT-qPCR结果一致,显示随着宫颈病变进展,GATA3阳性表达细胞呈减少趋势,而STAT3阳性细胞显著增多;Western Blot实验结果显示:GATA3蛋白在宫颈癌细胞中呈低表达,而STAT3蛋白在宫颈癌细胞中呈高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。2Pearson相关性分析结果显示:在宫颈癌组织中miR-135a-5p与GATA3 mRNA的相对表达量呈负相关(r=-0.6656,P<0.05);GATA3与STAT3 mRNA相对表达量呈负相关(r=-0.4534,P<0.05)。3采用TargetScan预测miR-135a-5p的靶基因,结果表明miR-135a-5p与GATA3 3’UTR具有结合位点,然后采用双荧光素酶报告基因实验验证两者的作用,结果显示miR-135a-5p可靶向抑制GATA3 3’UTR的转录活性。4在HeLa细胞中转染miR-135a-5p inhibitor敲低其表达,RT-qPCR及Western Blot结果表明:与miR-NC组相比,miR-135a-5p inhibitor组中GATA mRNA及蛋白表达水平有所回升,而STAT3表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。5宫颈癌临床病理参数相关性分析结果证实:miR-135a-5p的表达量与临床分期及淋巴结转移情况具有相关性(P<0.05);GATA3 mRNA的表达量与临床分期、间质浸润深度以及淋巴结转移情况具有相关性(P<0.05)。结论 1宫颈癌中miR-135a-5p的表达升高,GATA3的表达降低,STAT3的表达升高。2 miR-135a-5p可靶向抑制GATA3的转录活性,继而激活STAT3的表达,促进宫颈癌的发生、发展。3在宫颈癌细胞中敲低miR-135a-5p的表达后会适当解除对GATA3的抑制作用,降低STAT3的表达活性,miR-135a-5p可能成为靶向治疗的新靶点。图9幅;表5个;参116篇。