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目的:1.设计并制备多条结核特异性抗原多肽ESAT-6、CFP-10和Ag85B,并从中优选出特异性较高的肽段。2.构建新型的超灵敏纳米免疫电化学传感器,探讨其用于结核感染诊断的价值。方法:1.参考文献并利用抗原表位分析软件设计多条结核特异性抗原多肽,收集189例结核病患者外周血单个核细胞(PBMC),分别用结核特异性抗原多肽ESAT-6、CFP-10和Ag85B刺激PBMC培养72 h,收集细胞培养上清,用ELISA法检测上清中分泌的IFN-γ水平,筛选出能刺激PBMC分泌较多IFN-γ的多肽。2.收集151例结核病患者PBMC,用ELISA法筛选出来的结核特异性抗原多肽ESAT-6、CFP-10和Ag85B单独或以不同组合方式刺激PBMC培养22 h,用ELISPOT法检测斑点形成数,筛选出能刺激PBMC形成较多斑点数的多肽或多肽库。3.在磁珠表面覆盖量子点和二抗,构建以磁珠-量子点-二抗复合物为免疫探针的新型超灵敏纳米免疫电化学传感器,利用前面实验筛选出来的抗原肽刺激结核病患者的PBMC分泌细胞因子IFN-γ,通过夹心免疫法和电化学中的方波溶出伏安法检测IFN-γ水平,判断结核感染。结果:1.设计并合成了10条ESAT-6多肽(编号E1-E10)、10条CFP-10多肽(编号C1-C10)以及9条Ag85B多肽(编号A1-A9)。2.通过ELISA法初步筛选出3条ESAT-6多肽(E3、E6、E9)、3条CFP-10多肽(C1、C6、C8)、3条Ag85B多肽(A2、A5、A9),通过ELISPOT法进一步筛选出不同多肽的优势组合。3.成功构建基于量子点的超灵敏电化学免疫传感器,该传感器在IFN-γ浓度从0.01pg/m L到10ng/m L范围内,与Cd2+离子溶出峰电流成良好的线性关系(R2=0.966),在实际样品检测结果中与ELISA结果一致,有望用于临床结核感染的诊断。结论:结核特异性抗原多肽E3、E6、E9、C1、C6、C8、A2、A5、A9具有较好的特异性,其不同的组合方式构成的多肽库在刺激结核病患者PBMC分泌IFN-γ的特异性进一步提高,在IFN-γ释放试验中有重要应用价值。新型的基于量子点的超灵敏电化学免疫传感器具有灵敏度高,稳定性好,响应速度快、价格低廉、操作简便等诸多优势,并且在样品实际检测中具有可行性,该纳米免疫传感系统有望用于临床结核感染的诊断以及其他病原微生物的检测和疾病的诊断。